非血緣HLA不全相合雙份臍血移植植入動(dòng)力學(xué)的基礎(chǔ)研究.pdf

1、背景與目的:臍血造血干細(xì)胞是良好的造血干細(xì)胞（haematopoietic stem cell，HSC）來源，但臍血中含有的HSC數(shù)量相對(duì)不足從而限制了其在成人中的應(yīng)用。使用雙份臍血混合移植治療白血病獲得成功，激起人們對(duì)其相互作用機(jī)制的研究。研究證實(shí)，接受雙份臍血移植的患者，大部分患者長(zhǎng)期造血重建的僅來源于一份臍血，而另一份臍血在植入早期即被排斥，但是雙份臍血移植的植入動(dòng)力學(xué)的機(jī)制目前尚無定論，推測(cè)雙份臍血中的淋巴細(xì)胞與優(yōu)勢(shì)份臍血的產(chǎn)生

2、相關(guān)。探討雙份非血緣臍血移植用于惡性血液病植入動(dòng)力學(xué)的規(guī)律和臨床療效。實(shí)驗(yàn)方面將雙份臍血的CD34+細(xì)胞與CD3+細(xì)胞混合培養(yǎng)，觀察CD3+細(xì)胞對(duì)CD34+細(xì)胞的增殖分化有無影響。
　　 方法:臨床上選擇21例惡性血液系統(tǒng)惡性疾病行非親緣雙份臍血移植的患者為觀測(cè)對(duì)象，使用復(fù)合擴(kuò)增熒光標(biāo)記短串聯(lián)重復(fù)序列（STR-PCR）結(jié)合毛細(xì)管電泳技術(shù)，動(dòng)態(tài)檢測(cè)DUCBT受者移植后臍血植入情況，統(tǒng)計(jì)與植入可能相關(guān)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)中建立液體和半固

3、體培養(yǎng)體系，將免疫磁珠分選純化的雙份臍血的CD34+細(xì)胞和CD3+細(xì)胞混合培養(yǎng)6天和14天。以流式細(xì)胞計(jì)數(shù)觀測(cè)CD34+細(xì)胞培養(yǎng)后的分化指標(biāo)（CD33，CD41，CD71）；計(jì)數(shù)集落形成單位（GM-CFU、BFU—E、GEMM-CFU）分析CD34+細(xì)胞的增殖情況。
　　 結(jié)果:1.臍血移植植入情況 18/21例DUCBT獲得造血重建，中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)（ANC）＞0.5×109/L的中位時(shí)間為移植后20（14～35）天，血小板

4、＞20×109/L的中位時(shí)間為移植后34.5（25～49）天。經(jīng)STR-PCR技術(shù)檢測(cè)顯示17/18例受者形成單份臍血的優(yōu)勢(shì)植入。非優(yōu)勢(shì)份臍血輸注的有核細(xì)胞總數(shù)（total nucleated cell，TNC）,CD34+細(xì)胞數(shù)和CD3+細(xì)胞數(shù)為2.17×107 NC/Kg (0.96-3.98×107 NC/kg)，1.16×105CD34+/Kg (0.36–2.70×105CD34+/Kg)與1.71×106CD3+/Kg (0

5、.40-10.65×106 CD3+/kg)，優(yōu)勢(shì)份臍血此兩項(xiàng)分別為2.34×107 NC/Kg (1.87-4.45×107NC/kg),1.15×105CD34+/Kg(0.08–4.00×105CD34+/Kg)和3.225×106 CD3+/Kg(0.51-13.92×106CD3+/kg，差異不具有顯著性(P=0.718,0.936,0.073)。 2.液體共培養(yǎng)后各份CD34+細(xì)胞表面分化指標(biāo)的變化臍血CD34+細(xì)胞分選富集

6、的純度為（98.5±0.92）％。3天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的各項(xiàng)分化指標(biāo)無差異（P>0.05）；6天的CD33、CD71實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組，而CD41明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。3.半固體共培養(yǎng)后CD34+細(xì)胞增殖能力的變化實(shí)驗(yàn)組的紅系集落形成單位(BFU—E)及粒單細(xì)胞集落形成單位(GM-CFU)數(shù)低于對(duì)照組（P＜0.05），混合細(xì)胞集落形成數(shù)(GEMM-CFU)與對(duì)照組無差別（P>0.05）。
　　 結(jié)論: 1.雙份臍血移植