人臍血基質(zhì)細(xì)胞對(duì)小鼠單倍體相合外周血干細(xì)胞移植GVHD調(diào)節(jié)作用.pdf

1、研究背景:
　　異基因造血干細(xì)胞移植(Allo-HSCT)是惡性及非惡性造血功能紊亂、某些免疫缺陷性疾病、自身免疫性、遺傳代謝性疾病等的有效治療手段。過去的20年里, Allo-HSCT的臨床應(yīng)用發(fā)生了巨大變化,由原先的比較單一的人白細(xì)胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)相合的同胞間的清髓移植轉(zhuǎn)向一個(gè)更為復(fù)雜的領(lǐng)域,尤其在 HLA半相合移植方面取得了重要進(jìn)展,這一全新的移植方式有效解決了既往供者來源緊缺

2、、配型困難問題,使得90％以上的患者可以在父母、子女、兄弟姐妹等親緣關(guān)系中找到合適供者。
　　近來,針對(duì)HLA半相合造血干細(xì)胞移植方式提出了很多新的策略。經(jīng)處理或者不經(jīng)處理的骨髓(bone marrow,BM)聯(lián)合或者不聯(lián)合外周血干細(xì)胞(peripheral blood stem cell,PBSCs),成為臨床上最常見的干細(xì)胞來源。然而,骨髓采集物中含有大量紅細(xì)胞,當(dāng)供受者血型不合時(shí),進(jìn)行移植之前需要去除骨髓中的紅細(xì)胞或者血漿。

3、此外,骨髓采集為有創(chuàng)操作,采集過程中需要實(shí)施麻醉,增加了供者的痛苦和風(fēng)險(xiǎn)。PBSCs采集方便,有效避免了上述骨髓移植帶來的問題。外周血來源的移植物不僅具有豐富的CD34+細(xì)胞可大大提高植入率,且采集物比較干凈,受紅細(xì)胞影響小。然而,外周血中含有豐富的成熟T細(xì)胞,約為骨髓的5-10倍,大大增加了移植后GVHD的發(fā)生。
　　我們實(shí)驗(yàn)室前期工作中發(fā)現(xiàn)一種來源于人臍血的基質(zhì)細(xì)胞,稱為人臍血源基質(zhì)細(xì)胞(hUCBDSCs),hUCBDSCs可

4、以在多種因子特定組合下實(shí)現(xiàn)體外的增殖擴(kuò)增。同時(shí),hUCBDSCs表面高表達(dá) HLA-I分子,HLA-II類分子及其他共刺激分子表達(dá)較少,具有較低的免疫原性。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其具有抑制異種T細(xì)胞增殖的功能,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)hUCBDSCs具有減低小鼠MHC半相合骨髓造血干細(xì)胞移植后GVHD的能力。本研究旨在探討hUCBDSCs對(duì)于小鼠MHC半相合PBSCT后GVHD的調(diào)節(jié)作用。
　　一.研究內(nèi)容及方法:
　　1.參照科室常規(guī)方法,使用

5、6%明膠聯(lián)合1.077g/LPercoll分離hUCBDSCs,特定的細(xì)胞因子組合下進(jìn)行細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增;
　　2.雌性 C57BL/6×BALB/c F1受鼠接受7.0Gy60Coγ射線照射后,經(jīng)尾靜脈輸注雄性供鼠 C57BL/6來源的外周血單個(gè)核細(xì)胞(MNC)(1×106/只)、脾臟細(xì)胞(1×107/只),構(gòu)建小鼠MHC半相合外周血干細(xì)胞移植后GVHD模型;
　　3.將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的hUCBDSCs(1×106/只)經(jīng)尾

6、靜脈輸注到已構(gòu)建的MHC半相合外周血造血干細(xì)胞移植GVHD模型上,從小鼠生存率、臨床表現(xiàn)、靶器官(肝臟、小腸、皮膚)病理解剖評(píng)定各組小鼠GVHD發(fā)生情況;
　　4.流式細(xì)胞儀檢測移植后不同時(shí)間點(diǎn)(1周、2周、3周、4周)各組小鼠脾臟NK細(xì)胞比例,以及移植后3周小鼠脾臟Th1、Th2細(xì)胞比例,初步探索hUCBDSCs調(diào)節(jié)MHC半相合外周血造血干細(xì)胞移植后GVHD的作用機(jī)制。
　　二.主要研究結(jié)果:
　　1.按照科室既往的

7、方法,成功實(shí)現(xiàn)hUCBDSCs的體外培養(yǎng)擴(kuò)增。
　　2.通過小鼠生存率、臨床表現(xiàn)、靶器官病理表現(xiàn)及嵌合率的檢測證明MHC半相合外周血造血干細(xì)胞移植GVHD模型構(gòu)建成功。
　　3. hUCBDSCs可顯著延長移植后實(shí)驗(yàn)組小鼠生存時(shí)間,降低死亡率(P<0.05);hUCBDSCs可顯著降低移植后多個(gè)時(shí)相點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組小鼠臨床表現(xiàn)及靶器官組織病理GVHD評(píng)分(P<0.05),提示聯(lián)合hUCBDSCs輸注可有效減輕小鼠MHC半相合PBSC