hGRβ和剪接因子SRp30c mRNA的表達(dá)與糖皮質(zhì)激素敏感性的相關(guān)性研究.pdf

1、背景糖皮質(zhì)激素(GC)是臨床上治療許多慢性炎癥性疾病的首選藥物。大多數(shù)患者通過應(yīng)用激素能夠取得滿意療效，但有部分患者對激素治療不敏感，稱為激素抵抗型患者[1]。激素抵抗現(xiàn)象在哮喘、慢性鼻竇炎、腎病綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、潰瘍性結(jié)腸炎、過敏性皮炎等許多疾病中都有報(bào)道，它更像是一種獨(dú)立的疾病為其臨床治療提出了一個(gè)嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此，了解激素抵抗的發(fā)生機(jī)制顯得尤其重要。GC是通過糖皮質(zhì)激素受體(hGR)發(fā)揮藥理作用的。人的細(xì)胞中

2、存在兩種hGR亞型——hGR0和hGRβ，它們是由hGR基因的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物pre-mRNA經(jīng)過不同的剪接途徑而產(chǎn)生。hGRα可以與GC結(jié)合進(jìn)而介導(dǎo)GC的抗炎、抗免疫等生物學(xué)效應(yīng)，而hGRB被認(rèn)為是hGRQ的內(nèi)源性抑制因子。國內(nèi)外已有許多研究證據(jù)表明激素抵抗的發(fā)生與hGRB表達(dá)異常增多有關(guān)。近來又有研究提示富含絲氨酸／精氨酸蛋白家族(serine／arginine-richproteins，SR蛋白家族)成員SRp30c在促進(jìn)正常人中性粒

3、細(xì)胞的hGRpre—mRNA發(fā)生選擇性剪接形成編碼hGRβmRNA的過程中發(fā)揮重要作用。因此，剪接因子SRp30c可能在激素抵抗型患者體內(nèi)表達(dá)異常增高從而刺激hGRpre—mRNA的選擇性剪接途徑致使hGRB表達(dá)增多，結(jié)果拈抗hGRa的作用導(dǎo)致患者對激素反應(yīng)不敏感。 目的:探討人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中糖皮質(zhì)激素受體Q和β(hGRα和hGRB)，剪接因子SRp30cmRNA的表達(dá)水平與糖皮質(zhì)激素治療效應(yīng)之間的關(guān)系，以及通過

4、觀察SRp30c與hGRβ表達(dá)之間的關(guān)系，探討其在hGRpre-mRNA剪接中的作用。 方法:收集14例激素抵抗患者和14例激素敏感患者(分別包括5例哮喘患者、5例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和4例腎病綜合征患者)、12例健康對照者，激素抵抗的入選標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)文獻(xiàn)上各病種對SR的定義。取受試者外周靜脈血，分離出單個(gè)核細(xì)胞，用TRIZOL試劑提取RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，設(shè)計(jì)并合成hGRQ、hGRβ、SRp30c及內(nèi)參照6APDH(甘油醛3磷酸

5、脫氫酶)的引物，采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)的方法擴(kuò)增受試者PBMC中特異性目的產(chǎn)物，掃描目的條帶(hGRQ、hGRβ及SRp30c)的光密度值，將其與GAPDH條帶光密度值的比值作為其表達(dá)水平的定量指標(biāo)。 結(jié)果:激素抵抗組、激素敏感組及正常人體內(nèi)均有hGRα、β和SRp30c的表達(dá)。各擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小與理論設(shè)計(jì)要求所得的片段長度相符。hGRα、β和SRp30c的表達(dá)在三個(gè)不同病種間無顯著性差異。三組hGRQmRNA

6、表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其hGRa／甘油醛3磷酸脫氫酶(GAPDH)mRNA分別為1．44±O．14，1．46±0．¨，1．52±0．10；但激素抵抗組hGR0mRNA表達(dá)明顯高于激素敏感組和正常對照組(P<0．01)，其hGRB／GAPDHmRNA分別為0．53±0．08，0．43±O．05，0．41±0．07；激素抵抗組SRp30cmRNA表達(dá)也明顯高于激素敏感組和正常對照組(P<0．01)，其SRp30c／GAPDHmRNA分別