HBV野生株和核殼蛋白變異株在HepG2細(xì)胞的HLA-I表達(dá)及調(diào)節(jié)機(jī)制.pdf

1、對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)野生株及核殼蛋白變異株L97和V60在HepG<,2>細(xì)胞HLA-I表面表達(dá)的特性及其調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行初步探討,試圖認(rèn)識(shí)病毒及其變異與宿主細(xì)胞相互作用和影響.構(gòu)建HBV基因組野生株和核殼蛋白變異株穩(wěn)定表達(dá)載體,提供實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)材料.通過定點(diǎn)突變技術(shù)將1.2拷貝HBV(adr亞型)野生株質(zhì)粒p3.8Ⅱ構(gòu)建成核殼蛋白變異株L97和V60質(zhì)粒,經(jīng)序列測(cè)定證實(shí)nt2189A→C和nt2078C→G.3株質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG<,

2、2>細(xì)胞DNA的Southern blot雜交均顯示明顯的3.8kb雜交帶,培養(yǎng)上清均測(cè)定出HBV抗原,表明具有生物活性,分別亞克隆入EB病毒表達(dá)載體EBO-plpp使能穩(wěn)定表達(dá).重組載體EBO-WT、EBO-L97和EBO-V60作限制性內(nèi)切酶酶切鑒定及再次測(cè)序確定點(diǎn)突變.測(cè)定HBV野生株和變異株L97、V60誘導(dǎo)HepG<,2>細(xì)胞膜HLA-I/抗原肽復(fù)合物表達(dá)的強(qiáng)度,探討各株在宿主細(xì)胞HLA-I表面表達(dá)的特性及核殼蛋白熱點(diǎn)變異對(duì)H