siRNA干擾人肝癌細胞株HepG2生存素表達的實驗研究.pdf

1、本研究分為三個部分： 第一部分肝癌組織中survivin蛋白、PCNA的表達及其與預后的關系 目的：探討人肝癌組織中survivin蛋白及增殖細胞核抗原(PCNA)的表達及其與預后的關系。 方法：應用免疫組織化學染色方法對46例原發(fā)性肝癌組織中survivin蛋白與PCNA的表達情況進行檢測，并結合臨床預后進行分析。 結論：survivin蛋白對促進肝癌細胞快速增殖具有重要作用，survivin蛋白的表達

2、情況可以作為判斷肝癌病人預后的重要指標。 第二部分RNA干擾對肝癌細胞survivin基因表達及細胞凋亡的影響 目的：探討將survivin基因特異性小干擾性RaNA(small interfering RNA，siRNA)轉染肝癌細胞hepG2對survivin基因表達及細胞凋亡的影響。 方法：將體外合成的survivin特異性的siRNA序列1、序列2和對照序列，通過Lipofectamin2000分組轉染肝

3、癌細胞hepG2，應用RT-PCR及Westcrn印跡方法檢測肝癌細胞survivin mRNA和蛋白的變化，應用MTT法及流式細胞技術評價其對體外培養(yǎng)肝癌細胞增殖和凋亡的影響。 結論：Survivin基因特異性siRNA轉染hepG2細胞可抑制survivin mRNA和survivin蛋白的表達，并可體外抑制肝癌細胞增殖，誘導肝癌細胞凋亡的發(fā)生。 第三部分：RNA干擾Survivin基因聯(lián)合順鉑對肝癌HepG2細胞凋

4、亡的影響 目的：探討將survivin基因特異性小干擾性RNA(small interfering RNA，siRNA)轉染肝癌細胞hepG2同時聯(lián)合應用順鉑對survivin基因表達及細胞凋亡的影響。 方法：將體外合成的survivin特異性的siRNA序列和對照序列，通過Lipofectamin2000分組轉染肝癌細胞hepG2，24小時后再加入順鉑。應用RT-PCR及Westem印跡方法檢測肝癌細胞survivin