2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、一、研究背景 卵圓細胞(ovalcell,OVC)是存在肝臟組織中的能自我復(fù)制并具有多向分化潛能的成體干細胞,它既可以長期增殖,又可以分化為成熟肝細胞和膽管細胞。OVC在肝細胞發(fā)育、生長、增生及癌變等生理和病理生理過程中起著重要作用。正常情況下肝臟細胞處于靜止期,分裂增殖緩慢,卵圓細胞極少被檢測到。當(dāng)肝臟受到嚴重損傷或肝細胞的增殖受到抑制時,卵圓細胞被激活,增殖,分化形成成熟肝細胞。肝臟嚴重損傷時,卵圓細胞受自身狀態(tài)和微環(huán)境的調(diào)

2、節(jié),分化為成熟肝細胞和膽管細胞,但其分化方向并不是固定不變,有研究表明,卵圓細胞在特定的自身狀態(tài)和微環(huán)境的調(diào)節(jié)下,可以分化為肝癌細胞。另有研究發(fā)現(xiàn),肝損傷時,OVC不僅出現(xiàn)在匯管區(qū),而且還存在于肝小葉內(nèi)。OVC其特點是細胞小,呈卵圓型,核大而胞漿少。研究發(fā)現(xiàn)OVC與原發(fā)性肝細胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)關(guān)系密切。以3'-甲基-4-二甲基偶氮苯(3'-methyl-dimethylaminoazobenz

3、ene,DAB)為誘導(dǎo)劑,建立大鼠肝臟OVC增殖模型,密度梯度離心法分離OVC,在此基礎(chǔ)上,我們采用光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡和免疫組化方法鑒定OVC。利用Y染色體體細胞的特異性PCR檢測技術(shù)來尋找卵圓細胞在體內(nèi)分化為肝癌細胞的直接證據(jù)。把分離出來的雄性大鼠肝卵圓細胞接種于雌性大鼠肝內(nèi),然后對雌性大鼠進行致癌劑誘導(dǎo),在雌性大鼠的肝癌組織中利用PCR檢測技術(shù)分析肝癌細胞的來源。 二、目的 建立大鼠肝卵圓細胞的增殖模型,并探索其

4、分離及鑒定的方法,對研究肝癌的組織起源具有重要意義。利用Y染色體體細胞的特異性來尋找卵圓細胞分化為肝癌細胞的直接證據(jù),從而為卵圓細胞源性的研究及臨床肝癌治療方法提供理論依據(jù)。 三、方法 1.采用DAB飼喂大鼠,誘導(dǎo)建立肝癌動物模型,結(jié)果顯示DAB是一種簡單經(jīng)濟有效的肝癌誘導(dǎo)劑。 2.采用Ⅳ型膠原酶分次靜脈灌注和改良密度梯度離心法分離肝臟卵圓細胞,分離成功后,用F12和DMEM(1∶1)培養(yǎng)液懸浮細胞,臺盼藍染色細

5、胞活力達95%,接種于塑料培養(yǎng)瓶于孵箱中培養(yǎng)。通過HE染色、免疫組組織化學(xué)SABC法及透射電鏡的方法進行卵圓細胞的鑒定。結(jié)果顯示該方法能成功獲得高密度的細胞,所分離的細胞形態(tài)學(xué)特點以及同時表達c-kit抗體、CD34抗體、波形蛋白抗體,符合卵圓細胞特點。 3.選擇健康雄性Wistar大鼠30只用于卵圓細胞的分離、提取和鑒定。飼喂每公斤含0.6克3'-甲基-4-二甲基偶氮苯的飼料(以下簡稱含DAB飼料)4wk,建立卵圓細胞增生的雄

6、性Wistar大鼠動物模型,提取雄性大鼠卵圓細胞備用。選擇雌性Wistar大鼠60只隨機平分成實驗組和對照組。實驗組按25mg/kg體重戊巴比妥腹腔麻醉,消毒開腹,用4[#]針頭吸取雄性Wistar大鼠卵圓細胞懸液,接種至雌性大鼠肝臟包膜下,每點106個,之后連續(xù)喂含DAB飼料14wk,促進肝腫瘤的生成。對照組不接種提取的雄性Wistar大鼠卵圓細胞懸液,連續(xù)喂含DAB飼料14wk。從GeneBank調(diào)出雄性大鼠的SRY基因,利用引物設(shè)

7、計軟件設(shè)計引物片斷。14wk后提取兩組大鼠肝腫瘤組織的基因組DNA,利用所設(shè)計的引物進行PCR擴增,對PCR產(chǎn)物進行電泳分析。 四、結(jié)果 1.通過鑒定得出提取的細胞為卵圓細胞,細胞多出現(xiàn)于匯管區(qū)膽管上皮層及中央靜脈周圍,細胞呈現(xiàn)嗜堿性,體積約為正常肝細胞的1/3。電鏡下觀察卵圓細胞核/漿比例大,細胞表面可見絨毛狀突起等特征。免疫組織化學(xué)檢測呈現(xiàn)棕黃色陽性結(jié)果。所分離的細胞形態(tài)學(xué)特點以及同時表達C-kit抗體、CD34抗體

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