從JAK3-STAT信號途徑探討莪術醇抑制Jurkat細胞增殖的機制.pdf

1、背景:
　　類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關節(jié)滑膜炎為主要病理表現(xiàn)的慢性自身免疫性疾病,其病因至今尚未明確,但滑膜內(nèi)CD4+T淋巴細胞的大量浸潤及滑膜細胞的過度增生被認為是誘發(fā)并加重RA滑膜炎癥的中心環(huán)節(jié)。RA患者滑膜淋巴細胞聚集區(qū)CD4+T細胞高表達Bcl-2蛋白,表現(xiàn)出抵抗凋亡的現(xiàn)象,因此誘導CD4+T細胞的凋亡或抑制該細胞的增殖可能是治療RA的一種有效方法。JAK3是一重要的酪氨酸激酶

2、,僅表達于淋巴細胞和造血系統(tǒng)中,JAK3與其下游的轉(zhuǎn)錄因子STATs一起構(gòu)成的JAK3/STAT信號途徑,在自身免疫性疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮著關鍵作用。莪術醇,又名姜黃環(huán)奧醇,為活血化瘀中藥莪術的揮發(fā)油中分離出的有效單體成分。該藥物單體具有較強的抗腫瘤作用,能夠有效地抑制多種惡性腫瘤細胞的增殖。因此,我們使用細胞表面表達CD4分子的Jurkat細胞作為CD4+T細胞的模型細胞,從JAK3/STAT分子水平探討莪術醇抑制Jurkat細胞增殖

3、的機制。
　　目的:
　　觀察莪術醇對Jurkat細胞增殖的影響,并從JAK3/STAT信號途徑探討其作用機制。
　　方法:
　　Jurkat細胞的常規(guī)培養(yǎng),收集處于對數(shù)期的Jurkat細胞進行實驗。流式細胞檢測正常的Jurkat細胞株表面的CD4分子的陽性表達率。IL-2刺激Jurkat細胞30min后,不同濃度(6.25、12.5、25、50mg/mL)莪術醇干預處理人Jurkat細胞24h,分別用新型四唑單

4、鈉鹽法、流式細胞技術觀察檢測該細胞增殖情況、細胞周期分布以及凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達變化。Hoechst33258染色,觀察莪術醇誘導的細胞凋亡形態(tài)學變化。設正常對照組、IL-2刺激組、JAK3抑制劑組及莪術醇干預組,Western blot檢測細胞中JAK3、STAT3及STAT5a磷酸化蛋白表達量的變化,并采用EMSA檢測轉(zhuǎn)錄因子STAT3、STAT5的DNA結(jié)合活性。
　　結(jié)果:
　　1.Jurkat細胞株表面CD

5、4分子的陽性表達率是(56.20±6.18)％。
　　2.IL-2刺激30min后,該組細胞的增殖活力與正常對照組之間沒有顯著性差異(P=0.780);IL-2刺激30min后,并經(jīng)不同濃度莪術醇處理24h后,Jurkat細胞的增殖活性呈濃度依賴性下降(P<0.05)。
　　3.莪術醇作用于Jurkat細胞的S~G2/M期,阻滯S期細胞向G2/M期移行,引起S期細胞堆積,導致細胞增殖受抑制。
　　4.經(jīng)莪術醇處理后,J

6、urkat細胞的Bcl-2蛋白表達水平受到抑制,并呈濃度依賴性下降。
　　5.正常對照組與IL-2刺激組中p-JAK3、p-STAT3、p-STAT5a蛋白的表達水平均呈較高的表達水平。與IL-2刺激組相比,JAK3抑制劑組及莪術醇干預組(50mg/mL)兩者變化趨勢相一致,p-JAK3及p-STAT5a的蛋白表達水平明顯下降(P<0.01),而p-STAT3的表達水平無明顯變化(P=0.959,P=0.585,P=0.262)。

7、
　　6.正常對照組與IL-2刺激組中轉(zhuǎn)錄因子STAT3、STAT5均表現(xiàn)出較強的DNA結(jié)合活性。與IL-2刺激組相比,JAK3抑制劑組及莪術醇干預組(50mg/mL)兩者變化趨勢相一致,STAT3、STAT5的DNA結(jié)合活性均受到抑制(P<0.01)。
　　結(jié)論:莪術醇有可能通過下調(diào)Bcl-2蛋白的表達,抑制JAK3、STAT5a蛋白的磷酸化,下調(diào)STAT3、STAT5的DNA結(jié)合活性而抑制了Jurkat細胞的增殖,誘導凋