δEF1誘發(fā)乳腺癌產(chǎn)生他莫苷芬耐藥性的研究.pdf

1、乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，70％-80%的乳腺癌是激素依賴性的。體內(nèi)雌二醇(estrogen)濃度過高時(shí)，estrogen與相應(yīng)受體(estrogen receptor，ER)結(jié)合，不斷向下游傳遞信號(hào)，刺激乳腺細(xì)胞增殖，誘發(fā)癌變。臨床上采用雌激素拮抗劑等內(nèi)分泌療法可以有效控制ER陽(yáng)性乳腺癌的生長(zhǎng)。然而，在臨床上大約一半ER陽(yáng)性的乳腺癌晚期患者可迅速對(duì)他莫西芬等抗雌激素藥物產(chǎn)生耐藥，主要原因歸結(jié)為ER表達(dá)的下調(diào)或缺失，以及ER與其它生

2、長(zhǎng)因子途徑存在著交互作用等，最終導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞可不依賴于ER表達(dá)情況而生長(zhǎng)增殖。但是到目前為止，有關(guān)在乳腺癌抗雌激素治療過程中ER對(duì)雌激素敏感性降低的病理機(jī)制還知之甚少，極大地限制和降低了抗雌激素治療在乳腺癌特別是晚期乳腺癌患者中的療效。我們的前期研究結(jié)果顯示在乳腺癌標(biāo)本和組織中，δEF1和ER-α表達(dá)負(fù)相關(guān)，Ref.提示δEF1和estrogen/ER之間存在調(diào)控關(guān)系。
　　 為了初步證實(shí)δEF1在estrogen/ER ca

3、scade中的作用，我們首先用雌二醇處理乳腺癌MCF-7細(xì)胞，結(jié)果顯示雌二醇可以劑量依賴性及時(shí)間依賴性方式上調(diào)δEF1表達(dá)；反之，用RNAi干擾ER-α表達(dá)后雌二醇對(duì)δE目的上調(diào)作用明顯減弱，用ER-α特異性拮抗劑ICI182，780處理MCF-7細(xì)胞具有相同的效果，說明雌二醇對(duì)δEF1調(diào)控作用為ER-α依賴性。我們還證實(shí)了PKA和NF-κB信號(hào)通路能夠介導(dǎo)雌激素對(duì)δEF1表達(dá)的誘導(dǎo)作用。進(jìn)而，將δEF1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至MCF-7細(xì)胞，2

4、4小時(shí)后ER-α在mRNA表達(dá)水平下降近80%，Western結(jié)果同樣證實(shí)δEF1對(duì)ER-α表達(dá)具有抑制作用。我們進(jìn)一步構(gòu)建了不同長(zhǎng)度截短的δEF1啟動(dòng)子-熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，將它們與δEF1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至MCF-7細(xì)胞中，通過分析熒光素酶活性的變化初步確定E2-box參與介導(dǎo)δEF1對(duì)ER-α啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄抑制作用。E2-box定點(diǎn)誘變和定量染色質(zhì)免疫共沉淀(Q-CHIP)進(jìn)一步證實(shí)δEF1通過結(jié)合ER-α啟動(dòng)子上E-box位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)

5、對(duì)ER-α轉(zhuǎn)錄的抑制作用。更為重要的是，我們應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)了40例乳腺癌臨床組織標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)δEF1與ER-α的表達(dá)呈顯著的負(fù)相關(guān)。最后，我們檢測(cè)了δEF1對(duì)ER-α的抑制是否會(huì)影響MCF-7細(xì)胞對(duì)他莫西芬的敏感性。Tamoxifen是一種臨床上常見的治療陽(yáng)性乳腺癌的藥物，已知tamoxifen能通過ER-α抑制MCF-7細(xì)胞的增值，而上述實(shí)驗(yàn)證實(shí)δEF1抑制ER-α表達(dá)，因此在δEF1過表達(dá)的MCF-7細(xì)胞中用tamoxifen刺激