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1、整合素連接激酶(integrin-linkedkinase,ILK)是一個(gè)具有Ser/Thr蛋白激酶活性的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)蛋白,它在許多腫瘤中都有過量表達(dá),它的過量表達(dá)與腫瘤的形成和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。還有文獻(xiàn)報(bào)道ILK可能作為卵巢腫瘤早期篩查的生物標(biāo)記。這些都顯示對(duì)ILK的研究很有價(jià)值。我們實(shí)驗(yàn)室從事ILK的研究已多年,本研究的主要目的是嘗試制備兔抗ILK多克隆抗體,以摸索出一條制備其抗體的途徑,為相關(guān)的研究提供實(shí)驗(yàn)素材。 我們構(gòu)建了
2、表達(dá)ILK蛋白片段的pET32-ILK(1-1432)質(zhì)粒,將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá),并純化蛋白,用純化好的蛋白免疫新西蘭大耳白兔,然后對(duì)抗血清進(jìn)行了IgG的分離純化,制備出了兔抗ILK重組蛋白的多克隆抗體;同時(shí),委托專業(yè)公司合成ILK蛋白中的一段多肽,并與載體血藍(lán)蛋白相連接,免疫新西蘭大耳白兔,制備出兔抗ILK蛋白的多肽抗體,我們對(duì)抗血清進(jìn)行了IgG的分離純化,并做了效價(jià)分析。我們將兔抗IL
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