淋球菌多重耐藥基因mtr系統(tǒng)和毒力島基因的作用及EGS干預研究.pdf

1、第一部分:淋球菌多重耐藥性與mtrR基因點突變的關系 目的:探討多傳遞耐藥(multipletransferableresistance，mtr)外排系統(tǒng)中mtrR基因點突變與淋球菌流行株多重耐藥性的關系。 結論:淋球菌mtrR基因第45位gly(GGC→GAC)asp、14位his(CAC→CGC)arg和第51位phe(TTC→GTC)val突變與淋球菌流行株的多重耐藥性密切相關。 第二部分:淋球菌主動外排泵

2、mtrC基因原核表達系統(tǒng)pET-mtrC的構建、鑒定和表達 目的:在原核表達質粒pET-28a(+)中構建淋球菌膜蛋白mtrC表達質粒，并在大腸桿菌DE3中表達相關目的蛋白，為淋球菌耐藥的檢測和耐藥機制的研究提供基礎。 結論:淋球菌膜蛋白mtrC原核表達質粒構建和表達成功，為研究其mtr外排系統(tǒng)的耐藥機制打下基礎。 第三部分:淋球菌MtrC融合蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株建立和特性鑒定 目的:建立針對淋球菌

3、MtrC膜蛋白的單克隆雜交瘤細胞株，制備相應的單克隆抗體，用于淋球菌耐藥機制的研究和淋球菌耐藥的臨床檢測。 結論:本研究建立的單抗在檢測淋球菌MtrC膜蛋白時有高度特異性和敏感性。 第四部分:抗MtrC單克隆抗體對淋球菌CIP耐藥水平的影響 目的:探討用抗MtrC單克隆抗體(MtrCmonoclonalantibody，MtrCAb)干預淋球菌多傳遞耐藥(multipletransferableresistan

4、ce，mtr)系統(tǒng)后，mtr主動外排泵與同環(huán)丙沙星(CIP)耐藥的關系。 結論:淋球菌外排泵主動泵出CIP，導致菌體內CIP積累量不足，這是引起淋球菌對CIP高水平耐藥的重要因素；MtrCAb、NaN3可以阻斷外排泵蛋白泵出CIP，恢復淋球菌對CIP的敏感性。 第五部分:外源指導序列逆轉淋球菌多重耐藥性研究 目的:研究外源指導序列(externalguidesequence，EGS)在體外逆轉淋球菌臨床分離多重耐

5、藥株為敏感株中的作用與能力。 結論:PET-28a(+)-EGS-MtrC轉化淋球菌成功；導入EGS-MtrC的轉化菌部分恢復了對氨芐西林的敏感性；轉化菌對阿奇霉素、結晶紫、紅霉素、TritonX-100、四環(huán)素的敏感性增加。 第六部分:Mtr系統(tǒng)的生物信息學分析 目的:采用生物信息學的方法對多傳遞耐藥(mtr)外排系統(tǒng)中MtrR、MtrC、MtrD、MtrE蛋白的蛋白質理化性質、蛋白質疏水性、跨膜區(qū)、蛋白質的三維

6、結構、蛋白質功能進行分析。 結論:應用生物信息學的工具可以快速對淋球菌的目的基因進行分析，獲得其功能蛋白質的蛋白質理化性質數(shù)據(jù)，對蛋白質疏水性、跨膜區(qū)、蛋白質的三維結構、蛋白質的功能進行有效的預測，對研究淋球菌的耐藥系統(tǒng)及找到有效的干預措施有著重要的指導意義。 第七部分:淋球菌毒力島的生物信息學分析 目的:采用生物信息學的方法對淋球菌毒力島(pathogenicityisland)中TraH、TraG、AtlA的

7、蛋白質理化性質、蛋白質疏水性、跨膜區(qū)和蛋白質的三維結構進行分析。對淋球菌基因組和GGI島的堿基組成進行比較分析和整合位點分析。 結論:應用生物信息學的工具可以快速對淋球菌的目的基因進行分析，獲得其功能蛋白質的蛋白質理化性質數(shù)據(jù)，對蛋白質疏水性、跨膜區(qū)、蛋白質的三維結構進行有效的預測和進行比較基因組學研究，對研究淋球菌的毒力島及找到有效的干預措施有著重要的指導意義。 第八部分:封閉TraH基因的外源指導序列對淋球菌Ⅳ型分泌

8、系統(tǒng)功能的影響 目的:研究外源指導序列(externalguidesequence，EGS)在體外封閉traH基因對淋球菌Ⅳ型分泌系統(tǒng)(typeⅣsecretionsystem，T4SS)功能的影響。 結論:GGI島存在于淋球菌MS11株中，淋球菌29400、FA1090株中不含GGI島；PET-28a(+)-EGS-traH轉化淋球菌成功；導入EGS-traH的轉化菌t-MS11株生存能力下降，Ⅳ型分泌系統(tǒng)的分泌DNA