皇家外科學(xué)院大鼠視網(wǎng)膜色素變性發(fā)病過程中周期素依賴性蛋白激酶5與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的:觀察周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)和p25在不同病程皇家外科學(xué)院(RCS)大鼠視網(wǎng)膜色素變性(RP)模型視網(wǎng)膜中的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系,探討Cdk5/p25介導(dǎo)的光感受器細(xì)胞凋亡在RP的發(fā)病過程中的作用。
　　方法:取RCSRP大鼠(RCS大鼠)及正常對(duì)照RCS-rdy+大鼠17、25、35、60日齡組視網(wǎng)膜,光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu),測(cè)量視網(wǎng)膜外核層厚度;利用免疫組織化學(xué)染色法觀察各日齡組大鼠視網(wǎng)膜中Cdk5、p2

2、5和cleave-caspase3的表達(dá)及變化;采用Western blot法測(cè)定視網(wǎng)膜中cleave-caspase3的蛋白質(zhì)表達(dá)水平;原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)視網(wǎng)膜中凋亡發(fā)生的情況,并對(duì)凋亡細(xì)胞平均吸光度[A,舊稱光密度(OD)]值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:隨著出生日齡的增加,RCS大鼠視網(wǎng)膜厚度較正常對(duì)照組RCS-rdy+相應(yīng)日齡組大鼠視網(wǎng)膜厚度變薄,主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜視桿、視錐細(xì)

3、胞層和外核層明顯變薄。在RCS大鼠17、25、35日齡組,Cdk5,p25和cleave-caspase3在視網(wǎng)膜中的表達(dá)呈現(xiàn)為逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì),60日齡組表達(dá)下降;對(duì)照組RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜中表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著出生日齡的增加,RCS大鼠視網(wǎng)膜cleave-caspase3的表達(dá)明顯增加,以35日齡組增加最為明顯,而RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜cleave-caspase3的表達(dá)沒有明顯

4、的變化。TUNEL標(biāo)記法檢測(cè)結(jié)果顯示,各日齡組視網(wǎng)膜中凋亡細(xì)胞主要出現(xiàn)在視網(wǎng)膜外核層中,在RCS大鼠17、25、35日齡組,各組凋亡細(xì)胞呈逐漸增多的趨勢(shì),60日齡組凋亡細(xì)胞顯著下降;RCS-rdy+各日齡組凋亡細(xì)胞沒有明顯的變化。多變量偏相關(guān)分析結(jié)果顯示,Cdk5表達(dá)與p25表達(dá)、Cdk5表達(dá)與cleave-caspase3表達(dá)、Cdk5表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)、p25表達(dá)與cleave-caspase3表達(dá)、p25表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)、cle

5、ave-caspase3表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)的偏相關(guān)系數(shù)分別為0.949、0.808、0.959、0.887、0.979、0.852,p值為0.000,兩兩變量之間均顯著相關(guān)。
　　結(jié)論:17、25、35日齡RCS大鼠,隨著出生日齡的增加,其視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞逐漸增多,而Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。RCS大鼠視網(wǎng)膜中凋亡細(xì)胞變化趨勢(shì)與Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達(dá)水平基本一致,