虎杖免煎沖劑對糖尿病大鼠腎臟RAGE及VEGF表達的影響.pdf

1、目的：觀察虎杖免煎沖劑對糖尿病Wistar大鼠血糖、血脂、肌酐清除率、24h尿蛋白定量，以及腎臟病理結構和腎皮質(zhì)糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的影響，探討其對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及RAGE、VEGF在糖尿病腎病中的作用。 方法：將36只雄性Wistar大鼠，按體重隨機選取8只作為正常組(n=8)，給予普通飼料喂養(yǎng)；其余28只給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后，禁食12h，按35mg/kg(體重)鏈脲

2、佐菌素(STZ)尾靜脈注射，72h后尾靜脈取血，血糖≥16.7mol/L，尿糖+++～++++確定為糖尿病大鼠。成模的26只大鼠按血糖值隨機分為模型組(n=9)、虎杖組(n=9)和他汀組(n=8)，成模后即開始灌胃，虎杖組給予虎杖免煎沖劑1.5 g/(kg·d)，他汀組給予氟伐他汀7mg/(kg·d)，模型組和正常組給予等量蒸餾水，給藥4周。8周末留取大鼠24h尿液并檢測其尿肌酐、24h尿蛋白定量；麻醉條件下上腔靜脈取血，離心，-20℃

3、保存，測量血生化指標；取腎組織，剝離被膜，稱重，固定、包埋、切片、HE染色及電鏡下觀察腎臟病理改變；免疫組化SABC法檢測腎小球RAGE、VEGF的表達水平。 結果：(1)一般生化指標的變化與正常組大鼠相比，模型組、虎杖組和他汀組大鼠血糖、膽固醇、甘油三脂、肌酐清除率、24h尿蛋白定量、腎重/體重均顯著升高(P<0.0l，P<0.05)；虎杖組、他汀組大鼠較模型組大鼠肌酐清除率、24h尿蛋白定量、腎重/體重均明顯降低(P<0.0

4、1，P<0.05)，血糖也有所下降，但差異無統(tǒng)計學意義；他汀組大鼠大鼠膽固醇、甘油三脂較模型組明顯降低(P<0.05)；(2)腎組織病理觀察結果光鏡下觀察結果：與正常組大鼠相比，模型組、虎杖組、他汀組大鼠系膜區(qū)基質(zhì)增生，系膜區(qū)擴大，腎小球體積(GV)明顯增大(P<0.01)；虎杖組、他汀組較模型組基質(zhì)增生減輕，GV明顯減小(P<0.01)。電鏡下觀察結果：正常組大鼠足細胞體積較大，胞質(zhì)內(nèi)有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體。足突細長，排列整齊，基

5、底膜厚度(BMT)正常，均勻一致。模型組大鼠腎小球足突融合明顯，足細胞內(nèi)細胞器部分消失，系膜基質(zhì)增多，部分BMT明顯厚于正常組(P<0.01)，屏障結構破壞明顯。而虎杖組、他汀組大鼠腎小球足突排列較整齊，僅有少量足突融合，BMT薄于模型組(P<0.01)，厚于正常組9P<0.01)，屏障結構較完整；(3)腎組織RAGE、VEGF免疫組化染色結果免疫組化染色后，大鼠腎小球出現(xiàn)棕黃色物質(zhì)為陽性。正常組大鼠腎小球臟層上皮細胞有少量RAGE、V

6、EGF表達，為弱陽性；模型組大鼠腎小球中有明顯的RAGE、VEGF表達，腎小球臟層上皮細胞和系膜細胞有大量棕黃色染色，其陽性染色范圍及染色深度明顯增強，為強陽性；他汀組、虎杖組為陽性表達，其陽性染色范圍及染色深度明顯低于模型組。與正常組相比，模型組、虎杖組和他汀組大鼠腎小球RAGE、VEGF的表達增強(P<0.01)；虎杖組、他汀組大鼠腎小球RAGE、VEVF的表達明顯低于模型組(P<0.01，P<0.05)；(4)相關分析及回歸分析模

7、型組大鼠24hUP與RAGE、VEGF、BMT厚度成正相關(r=0.776，P<0.05；r=0.799，P<0.01；r：0.800，P<0.01)，線性多元逐步回歸分析方程：24hUP=0.572 RAGE+0.281 VEGF+1.496 BMT，方程的檢驗有顯著性水平(P<0.05)；‘VEGF與RAGE的表達成正相關(r=0.743，P<0.05)，回歸方程為VEGF=4.998+0.907 RAGE。 結論：(1)糖

8、尿病大鼠腎皮質(zhì)RAGE、VEGF表達特點及相關分析提示RAGE、VEGF增高是DN早期的病理機制之一，兩者相互影響，加速了DN的進程；(2)虎杖免煎沖劑可抑制基底膜增厚，下調(diào)腎組織中RAGE、VEGF的表達，減少DN早期的肌酐清除率及蛋白尿的排泄，有助于延緩腎小球硬化進程，對糖尿病大鼠腎臟有保護作用，其機制可能與下調(diào)RAGE、VEGF有關；(3)虎杖免煎沖劑對糖尿病大鼠可能有降血糖的作用，尚需進一步實驗證實。其對血脂的影響不大；(4)氟