液相芯片技術(shù)在病毒性腦炎診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、病毒性腦炎是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中最為常見的疾病之一，其進展迅速，致死致殘率高，且由于缺乏明確的診斷方法，給治療上帶來不少難題。不少患者雖然進行抗病毒治療，卻因不能確診病毒性腦炎或具體由哪一種病毒引起，因此不能有效、及時、準確的進行針對性治療。為降低該類疾病的死亡率并提高生存率，這就要求臨床上對導(dǎo)致疾病的病原體進行快速、準確的檢測鑒定。目前的檢測方法（如病原體培養(yǎng)、ELISA檢測、生化檢測等）費時費力或價格昂貴，且每次測試只能檢測一種病原體

2、，不能達到同時檢測幾種病原體的要求。
　　目的：本研究的目的是通過Luminex200懸浮陣列系統(tǒng)，建立一種新的多重PCR快速準確的診斷平臺，可高靈敏度、高特異性的同時檢測幾種病原體。這個平臺相較于傳統(tǒng)的分離鑒定病原學(xué)方法，將會提供更經(jīng)濟的檢測，更及時以及更全面的病原學(xué)信息。方法：本研究以病毒性腦膜炎和腦炎最為常見的5種病原體（EV71病毒,CA16病毒，ECHO病毒，乙腦病毒以及EB病毒）為研究對象。通過查找GenBank獲得5

3、種病原體的特異性基因，用oligo6對其保守序列進行特異性引物設(shè)計及探針設(shè)計，后BLAST比對篩選，確保所選用的引物及探針特異準確。選用可在液相中懸浮的獨特顏色編碼微球，共價耦合生物體特定的捕獲探針，通過探針捕獲檢測特定病原體PCR擴增產(chǎn)物（引物已用生物素標記），將SAPE（鏈霉親和素-R-藻紅蛋白）與生物素結(jié)合后，即可用Luminex200機器檢測，最后用臨床標本評價其可行性。結(jié)果：通過單重PCR體系驗證5種病原體引物的正確性后，進行

4、多重PCR體系的優(yōu)化，最終確定反應(yīng)條件為58℃，40循環(huán)。同時，優(yōu)化上機檢測的最佳雜交條件為55℃，15min。目前，可同時對EV71病毒、ECHO病毒、柯薩奇A16病毒、乙腦病毒、EB病毒進行5重檢測。檢測結(jié)果與PCR驗證實驗一致，特異性為100％。我們同時進行了44例臨床標本的檢測，其中EB病毒感染7例，乙型腦炎2例，腸道病毒感染35例，檢測結(jié)果與診斷基本相符，符合率達到97％。結(jié)論：基于Luminex200懸浮陣列系統(tǒng)的多重PCR