糖尿病大鼠心肌梗死后缺血區(qū)miRNA-503及其靶基因CCNE1和cdc25A的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、目的:MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性非編碼RNA小分子,主要通過與靶基因3'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region,3'UTR)結(jié)合促進(jìn)靶基因mRNA降解或抑制其翻譯,從而在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控基因表達(dá)。最近研究表明miRNA與心血管疾病密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)缺血后血管新生修復(fù)過程中miRNA表達(dá)譜明顯改變,某些特異性的miRNA可調(diào)控組織缺血后血管新生。但miRNA-503表達(dá)是否參與調(diào)節(jié)糖尿病心肌梗死后缺血區(qū)血管

2、新生形成低下這一發(fā)病過程目前鮮有研究報(bào)道。本研究通過觀察糖尿病大鼠心肌梗死周邊缺血區(qū)miRNA-503及其靶基因細(xì)胞周期素E1(CCNE1)和細(xì)胞分裂周期蛋白25A(The cell division cycle 25A,cdc25A)不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化,旨在探討miRNA-503在心肌缺血區(qū)血管新生中可能的調(diào)控作用。
　　方法:選用雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠126只,隨機(jī)分為兩組,2型糖尿病組(T2DM)經(jīng)腹

3、腔注射10％尼克酰胺(Nicotinamid,NA)(230mg/kg),15min后按65mg/kg尾靜脈注射冰浴的1%鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ,pH=4.5)誘導(dǎo)2型糖尿病。年齡與體重相匹配的非糖尿病大鼠組(NDM)經(jīng)腹腔注射10%尼克酰胺(230mg/kg),15min后按6.5ml/kg尾靜脈注射檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=4.5)。注射完畢后,普通飼料喂養(yǎng),定期測定空腹血糖及體重。9周造模成功后,2大組

4、又各分為心肌梗死組(AMI)與假手術(shù)組(Sham),所有心梗組(AMI)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支建立急性心肌梗死模型,假手術(shù)組(Sham)只穿線不結(jié)扎。4組大鼠分別于假手術(shù)或心肌梗死后第3、7、14、28天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)予處死。處死后測量心臟重量指數(shù)(heart weight index,HWI);Masson染色和VIII因子免疫組織化學(xué)法分別檢測各組心肌梗死面積及缺血區(qū)新生血管密度;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測缺血區(qū)miRNA-5

5、03表達(dá)量變化;Western blot檢測缺血區(qū)CCNE1和cdc25A蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)與NDM+AMI組相比,DM+AMI組3天時(shí),心臟重量指數(shù),梗死面積、新生微血管密度,兩組相比無明顯差異(p>0.05);而隨著時(shí)間延長,心臟重量指數(shù)逐漸降低(p<0.05),梗死面積擴(kuò)大(p<0.05)、新生微血管密度減少(p<0.05)。(2)與NDM+Sham組相比,DM+AMI組術(shù)后3天miRNA-503開始升高,14

6、天表達(dá)量達(dá)到高峰、28天后仍持續(xù)表達(dá),其上調(diào)的倍數(shù)分別為2.15±0.29、3.09±0.7、4.18±0.72、3.82±0.55(p<0.01)。(3)隨著缺血天數(shù)的增加,DM+AMI組缺血區(qū)組織各時(shí)間點(diǎn)cdc25A表達(dá)量顯著低于同天數(shù)NDM+Sham組,其下調(diào)的倍數(shù)分別為0.83±0.1、0.77±0.11、0.53±0.09、0.43±0.09(p<0.05)。而DM+AMI組缺血區(qū)組織各時(shí)間點(diǎn)CCNE1表達(dá)量與同天數(shù)NDM+S

7、ham組相比,其上調(diào)的倍數(shù)分別為0.94±0.14、1.1±0.06、0.98±0.16、1.08±0.1(p>0.05)。(4)Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示:DM+AMI組缺血區(qū)miR-503水平與cdc25A蛋白表達(dá)量成負(fù)相關(guān)(r=-0.748,p=0.005),而與CCNE1蛋白表達(dá)不相關(guān)(r=-0.245,p=0.443)。
　　結(jié)論:2型糖尿病大鼠心肌梗死后缺血區(qū)miRNA-503表達(dá)上調(diào),并在轉(zhuǎn)錄后水平抑制其靶基