清開靈有效組分及配伍抗神經(jīng)元缺血再灌注損傷的鈣相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、北京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文清開靈有效組分及配伍抗神經(jīng)元缺血再灌注損傷的鈣相關(guān)機(jī)制研究姓名：張金鈴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)指導(dǎo)教師：李澎濤20070601摘要中文摘要腦缺血后由于再通帶來(lái)的繼發(fā)性再灌注損傷，對(duì)缺血性中風(fēng)的預(yù)后和治療有重要的影響。腦缺血的病理生理是個(gè)多環(huán)節(jié)、多因素、多途徑損傷的酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng)，西醫(yī)干預(yù)其中某一途徑的治療，臨床療效甚微。而中醫(yī)學(xué)可從整體觀念以及中藥的復(fù)方特 點(diǎn)出發(fā)，利用其可作用于多環(huán)節(jié)多靶點(diǎn)，來(lái)干預(yù)

2、腦缺血損傷的病理過(guò)程。近年來(lái)研究表明，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣超載是諸多原因造成細(xì)胞損傷和死亡的共同途徑；清開靈有效組分梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母等具用解毒通絡(luò)、開竅醒神等功效。故本實(shí)驗(yàn)以缺血再灌注過(guò)程中游離鈣離子變化及相關(guān)機(jī)制的研究為切入點(diǎn)，觀察中藥單體梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母及配伍抗缺血再灌注損傷的機(jī)制。論文主要分為文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究?jī)蓚€(gè)部分，文獻(xiàn)綜述包括：缺血再灌注神經(jīng)元損傷與鈣相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制以及清開靈有效組分梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母

3、治療腦缺血再灌注損傷的研究概況。實(shí)驗(yàn)部分如下： 1 ．研究方法，實(shí)驗(yàn)研究選用新生2 4 小時(shí)內(nèi)S P F 級(jí)別的S D 大鼠，分離海馬組織培養(yǎng)海馬神經(jīng)元。采用鈣離子、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的特異性熒光分子探針及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)分析技術(shù)，觀察了清開靈有效組分梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母及配伍對(duì)海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子、線粒體活性及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)活性的影響。2 ．結(jié)果與結(jié)論2 ．1 清開靈有效組分及配伍對(duì)缺血再灌注海馬神經(jīng)元鈣超載的保護(hù)作用體外模擬缺血再

4、灌注1 2 小時(shí)，海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子明顯升高，缺血缺氧再灌注模型組與對(duì)照組比較細(xì)胞內(nèi)鈣離子明顯升高。梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母配伍藥物中大小兩個(gè)劑量對(duì)缺血缺氧再灌注后的神經(jīng)元均有降低胞漿鈣，明顯減輕缺氧神經(jīng)元鈣超載的作用，配伍藥緩解缺血缺氧后的鈣超載來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞功能；可初步提供清開靈有效組分配伍保護(hù)神經(jīng)元的理論依據(jù)。單體實(shí)驗(yàn)觀察到梔子苷有降低缺氧后細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的作用。從而減輕缺血神經(jīng)元的鈣超載；梔子苷可能發(fā)揮了穩(wěn)定受損神經(jīng)元

5、功能，降低代謝合成水平而增強(qiáng)神經(jīng)元抵御缺氧能力的作用，黃芩苷、膽酸、珍珠母基本對(duì)缺血再灌后的海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣超載未顯示其阻抑作用2 ．2 清開靈有效組分及配伍對(duì)海馬神經(jīng)元線粒體活性的影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示加入梔子苷、黃芪苷、膽酸、珍珠母配伍藥物5 u l ／2 m l 后可以升高缺血再灌注后下降的海馬神經(jīng)元線粒體熒光值，提高海馬神經(jīng)元線粒體活性，阻抑缺血再灌注對(duì)神經(jīng)元的損傷。提示我們配伍藥物的作用靶點(diǎn)之一可能是通過(guò)改善線粒體的活性來(lái)增加能

6、量A T P 的生成利用，從而改善線粒體鈣庫(kù)攝取胞漿鈣離子的能力，通過(guò)減低鈣超載來(lái)阻斷延緩神經(jīng)元的損傷。缺血缺氧后海馬神經(jīng)元線粒體活性下降，面各單組分藥物組出現(xiàn)了不同的反應(yīng)結(jié)果：黃芩苷組線粒體熒光值顯著高于缺血模型組，梔子苷、珍珠母組各濃度與模型組活性相當(dāng)，沒(méi)有顯示出保護(hù)作用；而膽酸2 5 u g ／m l 組線粒體活性低于模型組，出現(xiàn)了加重線粒體損傷的反作用；由此我們可推出，黃芩苷的保護(hù)海馬神經(jīng)元缺血再灌注的作用環(huán)節(jié)有線粒體途徑，黃芩