前深梨狀皮層T區(qū)ChAT免疫反應(yīng)活性與SVHRP改善難治性癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙關(guān)系.pdf

1、背景：癲癇是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病之一。其中顳葉癲癇60-70﹪發(fā)展成為難治性癲癇(Intractable epilepsy)，而且由于反復(fù)發(fā)作和長期用藥的毒副作用導(dǎo)致難治性癲癇病人常并發(fā)學(xué)習(xí)記憶功能障礙，其機制的深入探討以及篩選新藥乃需采用難治性癲癇動物模型進行實驗研究。 目的：本研究采用難治性癲癇大鼠模型，探討前深梨狀皮層T區(qū)的膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)免疫反應(yīng)陽性乙酰膽堿(Ach)能神經(jīng)元變化與蝎毒耐熱蛋白(Scor

2、pion Venom Heat-Resistant Protein，SVHRP)改善難治性癲癇大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶障礙的關(guān)系。 方法：50只大鼠一次頸部皮下注射驚厥劑量(10mg/kg)的KA，誘發(fā)SD大鼠出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus SE)。SE后被隨機分為實驗組(SE+NS)和實驗給藥組(SE+SVHRP)，并分別經(jīng)腹腔注射SVHRP(0.25mg/kg)和等容積生理鹽水連續(xù)10天。同時，另選30只正

3、常大鼠被一次給予頸部皮下注射等容積(2.0ml/kg)的生理鹽水后，亦被隨機分為兩組，分別為鹽水對照組(NS+NS)和鹽水給藥組(NS+SVHRP)，并分別經(jīng)腹腔注射SVHRP(0.25mg/kg)和等容積生理鹽水連續(xù)10天。SE后10天，上述各組動物均被給予閾下劑量(5mg/kg)的KA，檢測該動物是否出現(xiàn)對癲癇刺激的敏感性進行性提高。用Morris水迷宮測定動物的空間學(xué)習(xí)記憶能力。其后用免疫組織化學(xué)方法比較各組動物前深梨狀皮層T區(qū)C

4、hAT免疫反應(yīng)陽性的乙酰膽堿(Ach)能神經(jīng)元數(shù)目變化。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，方差分析進行組間均數(shù)差異性比較，P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1、行為學(xué)結(jié)果：SD大鼠(n=50)在注射驚厥劑量(10mg/kg)KA后，0-30min內(nèi)動物出現(xiàn)凝視，濕狗樣抖動(wet dog shake，WDS)等前驅(qū)癥狀；30-60min內(nèi)動物出現(xiàn)1-5級癲癇發(fā)作；60-90min內(nèi)動物反復(fù)自發(fā)出現(xiàn)4-5級癲癇發(fā)作；其后動物

5、癲癇發(fā)作持續(xù)時間延長，間隔變短伴有大量唾液分泌，出現(xiàn)各種精神運動癥狀，呈現(xiàn)SE，SE后10天，用閾下劑量(5mg/kg)KA檢測動物對癲癇刺激的敏感性。SE+Ns組有9只大鼠出現(xiàn)4-5級發(fā)作，其中5級發(fā)作5只，4級發(fā)作5支，3級發(fā)作2只；SE+SVHRP組有4只4-5級發(fā)作，中有3只出現(xiàn)5級發(fā)作；1只出現(xiàn)4級癲癇發(fā)作；2只出現(xiàn)3級發(fā)作；3只出現(xiàn)2級發(fā)作：4只出現(xiàn)1級發(fā)作；余下3只均未出現(xiàn)發(fā)作。NS+NS組和NS+SVHRP30只大鼠未出

6、現(xiàn)對癲癇刺激敏感性增強。經(jīng)有序變量的秩和檢驗，發(fā)現(xiàn)SE+NS組大鼠的癲癇發(fā)作級別明顯大于NS+NS組大鼠，差異有顯著性結(jié)(p<0.05)，提示SE誘發(fā)的難治性癲癇大鼠對癲癇刺激敏感性明顯增強。同時發(fā)現(xiàn)SE+SVHRP組大鼠的癲癇發(fā)作級別明顯小于SE+NS組大鼠，差異有顯著性結(jié)(p<0.05)，提示SVHRP明顯抑制難治性癲癇對癲癇刺激的敏感性。 2、水迷宮結(jié)果：與實驗給藥組、鹽水對照組、鹽水給藥組大鼠相比。實驗組大鼠的尋找潛伏期

7、在各個時間段都明顯延長，選擇性搜索策略差，穿越平臺的次數(shù)減少，減少在目標(biāo)象限(TR)而增加對側(cè)象限(OP)的游泳路徑和時間所占總路程和總時間的百分比。 3、免疫組化結(jié)果：實驗組前深梨狀皮層T區(qū)ChAT免疫反應(yīng)陽性的乙酰膽堿(Ach)能神經(jīng)元數(shù)目明顯少于實驗給藥組、鹽水對照組、鹽水給藥組，而其它三組大鼠前深梨狀皮層T區(qū)的ChAT免疫反應(yīng)呈陽性Ach能神經(jīng)元神經(jīng)元數(shù)目無明顯區(qū)別。 結(jié)論： 1、SE誘發(fā)的難治性癲癇大鼠