體外白細(xì)胞過(guò)濾對(duì)大腸埃希桿菌型膿毒癥犬天然免疫功能的影響.pdf

1、近年來(lái)研究認(rèn)為,感染或外傷后機(jī)體發(fā)生SIRS和MODS足由于過(guò)度釋放的炎癥介質(zhì)產(chǎn)生失控的炎癥發(fā)應(yīng)所導(dǎo)致的,而白細(xì)胞在其中起著至關(guān)重要的作用。中性粒細(xì)胞在黏附分子的介導(dǎo)下與內(nèi)皮細(xì)胞緊密黏附,并被各種促炎因子激活。激活的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞在趨化因子作用下,經(jīng)毛細(xì)血管間隙遷出血管,向組織移行。浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞能釋放30余種介質(zhì),通過(guò)兩種主要途徑,造成組織損傷。由于成熟白細(xì)胞大部分儲(chǔ)存在骨髓、肝、脾、淋巴等貯血器官中,循環(huán)血液中只占很小的一部

2、分,炎癥反應(yīng)過(guò)程中激活了的白細(xì)胞必須先從貯血器官進(jìn)入循環(huán)血液才能進(jìn)入組織中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)擬提出“白細(xì)胞過(guò)濾”假說(shuō)：在全身炎癥反應(yīng)過(guò)程中通過(guò)將循環(huán)血液中白細(xì)胞過(guò)濾一部分,可有效降低激活的炎癥細(xì)胞對(duì)組織、臟器造成的直接損傷,減少炎癥細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)含量,從而有效保護(hù)臟器功能。 第一部分：體外白細(xì)胞過(guò)濾對(duì)健康犬循環(huán)血液天然免疫功能的影響 目的：了解靜脈-靜脈通道的體外白細(xì)胞過(guò)濾模型對(duì)健康犬天然免疫功能的影響,根據(jù)白細(xì)胞過(guò)濾

3、和恢復(fù)與時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系建立相應(yīng)的濃度-時(shí)間曲線方程。 方法：犬靜脈麻醉后白細(xì)胞過(guò)濾組行無(wú)菌下雙側(cè)頸外靜脈穿刺建立體外白細(xì)胞過(guò)濾端口,通過(guò)輸血導(dǎo)管和白細(xì)胞過(guò)濾器將犬行體外白細(xì)胞過(guò)濾。對(duì)照組除不建立體外白細(xì)胞過(guò)濾管道通路,其余操作相同。以開(kāi)始白細(xì)胞過(guò)濾為起始時(shí)間,檢測(cè)白細(xì)胞過(guò)濾組犬0h、1h、2h、6h及對(duì)照組相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的平均動(dòng)脈壓、心率、體溫、血漿TNF-α濃度、IL-6濃度、IL-10濃度、中性粒細(xì)胞CD11/18與單核細(xì)胞C

4、D14表達(dá)。根據(jù)設(shè)定的16個(gè)時(shí)間點(diǎn)的白細(xì)胞濃度繪制白細(xì)胞濃度-時(shí)間曲線,以1h點(diǎn)將曲線分為白細(xì)胞過(guò)濾曲線和白細(xì)胞恢復(fù)曲線并行曲線擬合,建立最佳曲線方程。 結(jié)果：白細(xì)胞過(guò)濾組1h、2h、6h相對(duì)于0h平均動(dòng)脈壓升高的程度高于對(duì)照組(P<0.05),2h相對(duì)于0h時(shí)心率下降的程度大于對(duì)照組(P<0.05),體溫低于對(duì)照組(P<0.05),白細(xì)胞過(guò)濾組白細(xì)胞濃度低于對(duì)照組(P<0.05),白細(xì)胞過(guò)濾組與對(duì)照組紅細(xì)胞濃度變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

5、,白細(xì)胞過(guò)濾組血小板濃度低于對(duì)照組(P<0.05),白細(xì)胞過(guò)濾組血漿TNF-α濃度、CD11/18、CD14的表達(dá)與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,血漿IL-6濃度低于對(duì)照組,2h與6h相對(duì)于0h時(shí)血漿IL-10濃度增高的程度高于對(duì)照組(P<0.05)。 白細(xì)胞過(guò)濾曲線的最佳擬合方程為:y=7.479-0.152x+0.004x2-3.89×10-5x3(R2=0.987)和白細(xì)胞恢復(fù)曲線的最佳擬合方程為:y=0.943+0.111x-0.

6、001x2+7.27×10-7x3(R2=0.940)。 結(jié)論：靜脈-靜脈通道的體外白細(xì)胞過(guò)濾可有效降低健康犬白細(xì)胞濃度,對(duì)犬的血流動(dòng)力學(xué)無(wú)影響,不激活犬白細(xì)胞天然免疫功能。體外白細(xì)胞過(guò)濾可能通過(guò)減少白細(xì)胞濃度抑制全身炎癥反應(yīng)對(duì)機(jī)體的損傷。 第二部分：體外白細(xì)胞過(guò)濾對(duì)健康犬肺與肝組織的影響 目的：了解靜脈-靜脈通道的體外白細(xì)胞過(guò)濾模型對(duì)健康犬臟器是否有損傷作用。 方法：犬靜脈麻醉后白細(xì)胞過(guò)濾組行無(wú)菌下雙側(cè)

7、頸外靜脈穿刺建立體外白細(xì)胞過(guò)濾端口,通過(guò)輸血導(dǎo)管和白細(xì)胞過(guò)濾器將犬行體外白細(xì)胞過(guò)濾。對(duì)照組除不建立體外白細(xì)胞過(guò)濾管道通路,其余操作相同。于6h取肺組織和肝組織,測(cè)定兩組MPO酶活力,HE染色后行肺組織病理學(xué)評(píng)分,測(cè)定肺與肝NF-kB活性。 結(jié)果：白細(xì)胞過(guò)濾組與對(duì)照組肺組織與肝組織MPO酶活力,肺組織病理學(xué)評(píng)分,肺組織與肝組織NF-kB活性統(tǒng)計(jì)學(xué)均無(wú)差異(P>0.05)。 結(jié)論：靜脈-靜脈通道的體外白細(xì)胞過(guò)濾未對(duì)機(jī)體臟器造

8、成損傷。 第三部分：體外白細(xì)胞過(guò)濾對(duì)大腸埃希桿菌型膿毒癥犬天然免疫功能的影響 目的：建立大腸埃希桿菌型膿毒癥犬模型,了解體外白細(xì)胞過(guò)濾方法對(duì)膿毒癥犬天然免疫功能的影響。 方法：大腸埃希桿菌(O111:B4)經(jīng)靜脈注入健康犬體內(nèi)建立大腸埃希桿菌型膿毒癥犬模型。將膿毒癥犬隨機(jī)分為白細(xì)胞過(guò)濾組和對(duì)照組。白細(xì)胞過(guò)濾組將犬行體外白細(xì)胞過(guò)濾,對(duì)照組除不建立體外白細(xì)胞過(guò)濾管道通路,其余操作相同。以開(kāi)始注入大腸埃希氏桿菌點(diǎn)為O'

9、h,開(kāi)始白細(xì)胞過(guò)濾時(shí)間點(diǎn)為0h。檢測(cè)白細(xì)胞過(guò)濾組犬0'h、0h、1.5h、5h及對(duì)照組相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的平均動(dòng)脈壓、心率、體溫、動(dòng)脈血?dú)?、血漿TNF-α濃度、IL-6濃度、IL-10濃度、中性粒細(xì)胞CD11/18與單核細(xì)胞CD14表達(dá)。取肺腎組織病理鏡檢,測(cè)定肺泡灌沈液中TNF-α、IL-6、IL-10濃度,行細(xì)胞計(jì)數(shù),測(cè)定肺濕/干重比。 結(jié)果：白細(xì)胞過(guò)濾組MAP高于對(duì)照組(P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組與對(duì)照組心率變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；

10、白細(xì)胞過(guò)濾組體溫1.5h相對(duì)于0h下降的程度低于對(duì)照組(P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組RBC濃度、PLT濃度變化與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；白細(xì)胞過(guò)濾組白細(xì)胞濃度1.5h相對(duì)與0h下降的程度低于對(duì)照組(P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組pH值、PO2、PCO2、BE、Lac變化與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組與對(duì)照組血清TNF-α濃度、IL-6濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；白細(xì)胞過(guò)濾組IL-10濃度高于對(duì)照組(P<0.05);CD11/18的表

11、達(dá)白細(xì)胞過(guò)濾組5h相對(duì)于0h點(diǎn)下降的程度高于對(duì)照組P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組CD14的表達(dá)低于對(duì)照組(P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組肺泡灌洗液中TNF-α,IL-6濃度與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；白細(xì)胞過(guò)濾組肺泡灌沈液中IL-10濃度高于對(duì)照組,(P<0.05);白細(xì)胞過(guò)濾組肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)低于對(duì)照組(P<0.05);肺組織濕/干重比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：體外白細(xì)胞過(guò)濾可以有效改善大腸埃希桿菌型膿毒癥犬的血流動(dòng)力學(xué)、動(dòng)脈血?dú)?對(duì)血