p38MAPK在熱壓所致生精細胞凋亡中的作用及L-NAME對它的影響.pdf

1、　　目的:探討p38MAPK通路在熱壓誘導的生精細胞凋亡過程中的作用。研究L-NAME對隱睪生精細胞凋亡過程中磷酸化p38MAPK表達的抑制作用，揭示生精細胞凋亡過程中NOS/NO通路與p38MAPK通路之間的關(guān)系?！　》椒?將42日齡雄性SD大鼠建立單側(cè)隱睪模型，24只大鼠隨機分為假手術(shù)組、隱睪組、隱睪+溶媒組、隱睪+p38MAPK抑制劑(SB203580)組，每組6只大鼠，模型建立按文獻操作[9]，戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔

2、內(nèi)注射麻醉，下腹正中切口，隱睪組大鼠切斷右側(cè)睪丸引帶，用5-0尼龍線將右側(cè)睪丸固定于腹后壁后關(guān)腹，術(shù)后未注射任何藥物；隱睪+溶媒組及隱睪+SB203580組大鼠右側(cè)睪丸手術(shù)處理方法同隱睪組大鼠，術(shù)后分別腹腔內(nèi)注射溶媒或SB203580，每天一次，定時定量(100μg/kg)，假手術(shù)組將右側(cè)睪丸切斷引帶后還納入陰囊關(guān)腹。術(shù)后第七天處死，留取各組大鼠雙側(cè)睪丸稱濕重，常規(guī)組織學切片光鏡觀察各組右側(cè)睪丸生精上皮形態(tài)；TUNEL原位末端標記法結(jié)合

3、流式細胞術(shù)(FCM)檢測各組右側(cè)睪丸生精細胞凋亡；免疫組化和Westernblot觀察各組右側(cè)睪丸磷酸化p38MAPK蛋白表達的變化。將42日齡雄性SD大鼠建立單側(cè)隱睪模型，48只大鼠隨機分為假手術(shù)組、隱睪組、隱睪+生理鹽水組、隱睪+NOS抑制劑(L-NAME)組，每組12只大鼠，戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，下腹正中切口，隱睪組大鼠切斷右側(cè)睪丸引帶，用5-0尼龍線將右側(cè)睪丸固定于腹后壁后關(guān)腹，術(shù)后未注射任何藥物；隱睪+生

4、理鹽水組及隱睪+L-NAME組大鼠右側(cè)睪丸手術(shù)處理方法同隱睪組大鼠，術(shù)后分別腹腔內(nèi)注射生理鹽水或L-NAME，每天一次，定時定量(50mg/kg)，假手術(shù)組將右側(cè)睪丸切斷引帶后還納入陰囊關(guān)腹。術(shù)后第7天脫頸椎處死大鼠。留取各組大鼠雙側(cè)睪丸稱濕重；硝酸還原酶法測定各組右側(cè)睪丸組織NO含量，化學比色法測定各組右側(cè)睪丸組織NOS活性；常規(guī)組織學切片觀察各組右側(cè)睪丸生精上皮形態(tài)；TUNEL原位末端標記法結(jié)合流式細胞術(shù)(FCM)檢測各組右側(cè)睪丸生

5、精細胞凋亡；免疫組化檢測各組右側(cè)睪丸iNOS和磷酸化p38MAPK表達變化，Westernblot檢測各組右側(cè)睪丸磷酸化p38MAPK蛋白表達量的變化。　　結(jié)果:各組大鼠左側(cè)睪丸及假手術(shù)組左側(cè)與右側(cè)睪丸之間重量無明顯差異，其余各組右側(cè)隱睪均輕于左側(cè)睪丸重量，但隱睪+SB203580組隱睪重量明顯大于隱睪組及隱睪+溶媒組；隱睪組及隱睪+溶媒組之間各檢測指標差異無顯著性意義；凋亡指數(shù)(AI)在隱睪組及隱睪+溶媒組最高，隱睪+SB20358

6、0組次之，假手術(shù)組最低，差別均有顯著性意義；隱睪組及隱睪+溶媒組的生精細胞凋亡率明顯高于假手術(shù)組和隱睪+SB203580組。免疫組化顯示假手術(shù)組和隱睪+SB203580組的睪丸生精上皮內(nèi)無磷酸化p38MAPK表達，其余兩組隱睪生精上皮內(nèi)均有較強的磷酸化p38MAPK表達。Westernblot顯示，四組均有磷酸化p38MAPK的條帶，隱睪組和隱睪+溶媒組表達最強，隱睪+SB203580組次之，假手術(shù)組最弱。各組大鼠左側(cè)睪丸及假手術(shù)組左側(cè)

7、與右側(cè)睪丸之間重量無明顯差異，其余各組右側(cè)隱睪均輕于左側(cè)睪丸重量，但隱睪+L-NAME組隱睪重量明顯大于隱睪組及隱睪+生理鹽水組；隱睪組及隱睪+生理鹽水組之間各檢測指標差異無顯著性意義；凋亡指數(shù)(AI)在隱睪組及隱睪+生理鹽水組最高，隱睪+L-NAME組次之，假手術(shù)組最低，差別均有顯著性意義；隱睪組及隱睪+生理鹽水組的生精細胞凋亡率、睪丸組織NO含量和NOS活性均明顯高于假手術(shù)組和隱睪+L-NAME組。免疫組化顯示假手術(shù)組睪丸生精上皮內(nèi)

8、無iNOS表達，而其他三組的睪丸生精上皮內(nèi)均可見到iNOS的表達，且多見于凋亡的生精細胞；免疫組化顯示假手術(shù)組和隱睪+L-NAME組的睪丸生精上皮內(nèi)無磷酸化p38MAPK表達，其余兩組隱睪生精上皮內(nèi)均有較強的磷酸化p38MAPK表達。Westernblot顯示，四組均有磷酸化p38MAPK的條帶，而隱睪組和隱睪+生理鹽水組表達最強，隱睪+L-NAME組次之，假手術(shù)組最弱。　　結(jié)論1.SB203580能抑制熱壓誘導的生精細胞凋亡。2.熱