基于克隆異質性分離和鑒定人胃癌干細胞.pdf

1、腫瘤的發(fā)生是多種因素共同作用的結果,侵襲和轉移是惡性腫瘤的顯著特征,但并非所有的腫瘤細胞都具有無限增殖和轉移的能力。腫瘤干細胞(cancerstemcells,CSCs)理論認為CSCs是腫瘤中少數具有自我更新能力和分化潛能,并能產生耐藥的細胞亞群,是腫瘤發(fā)生、復發(fā)和轉移的根源。
　　 研究報道,在體外培養(yǎng)條件下,多種腫瘤細胞克隆具有形態(tài)異質性,可形成三種不同形態(tài)的克隆,分別稱為Holoclone,Meroclone和Parac

2、lone。三種克隆具有明顯不同的增殖能力,其中Holoclone克隆形態(tài)規(guī)則、細胞體積小且排列緊密,成瘤能力強,具有腫瘤干細胞的特性,而其它兩種類型克隆則不具備成瘤能力。已有多個研究表明胃癌中存在腫瘤干細胞,但目前仍缺乏直接證據。在胃癌中是否也存在克隆形態(tài)異質性,這種異質性是否可以用于胃癌干細胞的識別和分選,以及探索一種有效的富集胃癌干細胞的方法成為我們試圖解決的問題。
　　 本研究以人胃癌細胞株SGC-7901和BGC-823

3、為模型,動態(tài)觀察了胃癌細胞株SGC-7901和BGC-823的克隆在形態(tài)上的異質性并進行了分類,檢測了CD44,Musashi-1和CDX2在不同類型克隆中的表達,比較不同克隆細胞在裸鼠體內的成瘤能力,初步鑒定含腫瘤干細胞的克隆。本研究共分為以下三個部分:
　　 第一部分,動態(tài)觀察SGC-7901和BGC-823細胞的克隆在形態(tài)上的差異并分類,檢測不同克隆細胞的自我更新能力。結果發(fā)現SGC-7901和BGC-823細胞均可形成H

4、oloclone,Meroclone和Paraclone三種形態(tài)克隆。SGC-7901細胞克隆形成率為9.80±1.07%,三種克隆的比例分別為10.2%、56.0%和33.8%;BGC-823細胞克隆形成率為8.40+1.02%,三種克隆的比例分別為9.8%、54.0%和36.2%。再次克隆形成實驗結果顯示,來自Holoclone克隆的細胞不僅形成了與原有克隆類似的Holoclone克隆,還可形成Meroclone及Paraclone

5、克隆,表明Holoclone來源的細胞具有自我更新能力。
　　 第二部分,觀測了SGC-7901和BGC-823細胞克隆的分化異質性。本部分利用免疫熒光技術和免疫印跡法(Westernblotting)檢測了SGC-7901和BGC-823細胞克隆中兩種干細胞標志物CD44,Musashi-1和分化標志物CDX2的表達情況。免疫熒光結果表明以上兩種細胞克隆中Holoclone克隆CD44,Musashi-1的表達最強,CDX2表

6、達最弱;Paraclone克隆CDX2表達最強,CD44,Musashi-1表達最弱;Meroclone克隆上述三種標志物均有一定程度的表達,表達量居于Holoclone和Paraclone克隆之間。由于所提蛋白量不足,Westernblotting僅觀測了CD44和CDX2的表達情況,其結果與免疫熒光一致。
　　 第三部分,分離SGC-7901和BGC-823細胞不同形態(tài)克隆,觀察了不同形態(tài)克隆細胞在裸鼠體內的成瘤能力。本部分

7、利用克隆環(huán)收集了三種形態(tài)的克隆細胞,將不同克隆形態(tài)細胞接種于裸鼠皮下,觀察各組的成瘤能力。結果顯示,Holoclone克隆細胞具有較強的致瘤能力,而Meroclone和Paraclone克隆不具備致瘤能力。
　　 以上研究結果表明,SGC-7901和BGC-823細胞形成的克隆在形態(tài)和分化程度上具有異質性。來自Holoclone克隆的細胞具有自我更新、多向分化等腫瘤干細胞的特性,在活體內有較強的成瘤能力,Holoclone克隆富