基于克隆異質(zhì)性分離和鑒定人胃癌干細(xì)胞.pdf

1、腫瘤的發(fā)生是多種因素共同作用的結(jié)果,侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的顯著特征,但并非所有的腫瘤細(xì)胞都具有無限增殖和轉(zhuǎn)移的能力。腫瘤干細(xì)胞(cancerstemcells,CSCs)理論認(rèn)為CSCs是腫瘤中少數(shù)具有自我更新能力和分化潛能,并能產(chǎn)生耐藥的細(xì)胞亞群,是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。
　　 研究報(bào)道,在體外培養(yǎng)條件下,多種腫瘤細(xì)胞克隆具有形態(tài)異質(zhì)性,可形成三種不同形態(tài)的克隆,分別稱為Holoclone,Meroclone和Parac

2、lone。三種克隆具有明顯不同的增殖能力,其中Holoclone克隆形態(tài)規(guī)則、細(xì)胞體積小且排列緊密,成瘤能力強(qiáng),具有腫瘤干細(xì)胞的特性,而其它兩種類型克隆則不具備成瘤能力。已有多個研究表明胃癌中存在腫瘤干細(xì)胞,但目前仍缺乏直接證據(jù)。在胃癌中是否也存在克隆形態(tài)異質(zhì)性,這種異質(zhì)性是否可以用于胃癌干細(xì)胞的識別和分選,以及探索一種有效的富集胃癌干細(xì)胞的方法成為我們試圖解決的問題。
　　 本研究以人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和BGC-823

3、為模型,動態(tài)觀察了胃癌細(xì)胞株SGC-7901和BGC-823的克隆在形態(tài)上的異質(zhì)性并進(jìn)行了分類,檢測了CD44,Musashi-1和CDX2在不同類型克隆中的表達(dá),比較不同克隆細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力,初步鑒定含腫瘤干細(xì)胞的克隆。本研究共分為以下三個部分:
　　 第一部分,動態(tài)觀察SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的克隆在形態(tài)上的差異并分類,檢測不同克隆細(xì)胞的自我更新能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SGC-7901和BGC-823細(xì)胞均可形成H

4、oloclone,Meroclone和Paraclone三種形態(tài)克隆。SGC-7901細(xì)胞克隆形成率為9.80±1.07%,三種克隆的比例分別為10.2%、56.0%和33.8%;BGC-823細(xì)胞克隆形成率為8.40+1.02%,三種克隆的比例分別為9.8%、54.0%和36.2%。再次克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,來自Holoclone克隆的細(xì)胞不僅形成了與原有克隆類似的Holoclone克隆,還可形成Meroclone及Paraclone

5、克隆,表明Holoclone來源的細(xì)胞具有自我更新能力。
　　 第二部分,觀測了SGC-7901和BGC-823細(xì)胞克隆的分化異質(zhì)性。本部分利用免疫熒光技術(shù)和免疫印跡法(Westernblotting)檢測了SGC-7901和BGC-823細(xì)胞克隆中兩種干細(xì)胞標(biāo)志物CD44,Musashi-1和分化標(biāo)志物CDX2的表達(dá)情況。免疫熒光結(jié)果表明以上兩種細(xì)胞克隆中Holoclone克隆CD44,Musashi-1的表達(dá)最強(qiáng),CDX2表

6、達(dá)最弱;Paraclone克隆CDX2表達(dá)最強(qiáng),CD44,Musashi-1表達(dá)最弱;Meroclone克隆上述三種標(biāo)志物均有一定程度的表達(dá),表達(dá)量居于Holoclone和Paraclone克隆之間。由于所提蛋白量不足,Westernblotting僅觀測了CD44和CDX2的表達(dá)情況,其結(jié)果與免疫熒光一致。
　　 第三部分,分離SGC-7901和BGC-823細(xì)胞不同形態(tài)克隆,觀察了不同形態(tài)克隆細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力。本部分

7、利用克隆環(huán)收集了三種形態(tài)的克隆細(xì)胞,將不同克隆形態(tài)細(xì)胞接種于裸鼠皮下,觀察各組的成瘤能力。結(jié)果顯示,Holoclone克隆細(xì)胞具有較強(qiáng)的致瘤能力,而Meroclone和Paraclone克隆不具備致瘤能力。
　　 以上研究結(jié)果表明,SGC-7901和BGC-823細(xì)胞形成的克隆在形態(tài)和分化程度上具有異質(zhì)性。來自Holoclone克隆的細(xì)胞具有自我更新、多向分化等腫瘤干細(xì)胞的特性,在活體內(nèi)有較強(qiáng)的成瘤能力,Holoclone克隆富