膳食結(jié)構(gòu)對大鼠食欲調(diào)節(jié)及其作用機制探討.pdf

1、目的：膳食結(jié)構(gòu)與肥胖防治關(guān)系密切，但其作用機制目前尚不清楚。研究顯示人體食欲調(diào)節(jié)系統(tǒng)可能是膳食結(jié)構(gòu)與肥胖之間的橋梁。本研究擬通過：①給予Wistar幼鼠不同配方(均衡膳食、高脂、高蛋白質(zhì)、高碳水化合物)的飲食方案，觀察膳食結(jié)構(gòu)改變對大鼠外周食欲調(diào)節(jié)激素的作用，并進一步探討食欲調(diào)節(jié)激素改變對大鼠食物攝入和體重的影響；②探討血漿瘦素水平增高和瘦素抵抗與肥胖之間的關(guān)系；⑦在上述研究基礎(chǔ)上，從分子機制探討下丘腦食欲調(diào)節(jié)基因及其受體的變化；④為進

2、一步探討肥胖發(fā)生過程中食欲和能量調(diào)節(jié)基因所起的作用及其相互影響，采用基因芯片方法觀察高脂飲食對大鼠下丘腦食欲和能量調(diào)節(jié)基因的作用。 材料與方法：斷乳期3周齡清潔級雄性Wistar大鼠(體重40-60g)適應性飼養(yǎng)3天后按不同飲食方案隨機分為4組：對照組(Control)、高脂組(Fat)、高蛋白質(zhì)組(Pr，)、高碳水化合物組(CHO)。大鼠飼養(yǎng)12周。飼養(yǎng)期間記錄大鼠體重(1次/周)和平均進食量(2次/周)。大鼠處死后測量身長并

3、計算Lee's指數(shù)。大鼠下腔靜脈取血5-6ml置于抗凝管，血漿分為2管，1管檢測Tc、TG、HDL-C、和LDL-C(酶比色法)。另1管-80℃保存留待檢測外周食欲調(diào)節(jié)激素。大鼠處死后取除腦組織(視交叉前緣為前界，乳頭體前緣為后界，兩側(cè)界為下丘腦旁溝，切取深度約3mm)液氮保存。應用實時熒光定量PCR方法(realtimequantitativePCR)檢測大鼠下丘腦外周性食欲調(diào)節(jié)激素受體及中樞食欲調(diào)節(jié)激素的變化。使用肥胖相關(guān)基因檢測高

4、脂飲食大鼠下丘腦相關(guān)基因變化，基因表達變化(上調(diào)或下調(diào))超過2倍及以上為有顯著差異。 結(jié)果： 1、體重和Lee's指數(shù)：所有組大鼠初始體重無明顯差異。CHO組大鼠第4、5兩周體重明顯低于Control組。Pr組大鼠從第4周開始明顯低于Control和Fat組，此現(xiàn)象持續(xù)至實驗結(jié)束。Fat組大鼠從4周開始明顯高于Pr和CHO組，第8周開始明顯高于Control、Pr和CHO組大鼠，此現(xiàn)象持續(xù)至實驗結(jié)束。Fat組大鼠體重增長

5、速度明顯高于其他三組大鼠。12w時Pr組和CHO組大鼠Lee's指數(shù)明顯低于Control組和Fat組；其余各組之間Lee's指數(shù)比較無明顯差異。 2、進食量和能量攝入：Fat組大鼠平均飼料攝入量明顯低于Control、Pr、CHO組，其余三組間無明顯差異。雖然CHO組大鼠飼料攝入量無明顯增加，但從第2月開始，CHO組大鼠能量攝入明顯低于其他三組；其他各組大鼠能量攝入比較無明顯差異。 3、血脂代謝：Fat組大鼠血漿TC水

6、平高于Pr和CHO組大鼠，而與Control組無明顯差異。Fat組大鼠血漿TG水平低于Control和CHO組大鼠；所有組大鼠血漿HDL-C和LDL-C水平均無明顯差異。 4、血漿食欲調(diào)節(jié)激素：Fat組大鼠血漿瘦素水平明顯高于Control、Pr和CHO組大鼠。雖然Fat組大鼠血漿胰島素水平升高，而ghrelin水平降低，但均未達到統(tǒng)計學差異。所有組大鼠脂聯(lián)素水平無明顯差異。體重、Lee's指數(shù)與血漿leptin水平呈明顯正相關(guān)

7、(r為0.83和0.78，P＜0.01)。Ghrelin水平則與血漿leptin和胰島素水平呈負相關(guān)(r為-0.32和-0.38，P＜0.05)。第4周和第8周結(jié)束時Fat組大鼠血漿瘦素水平明顯Pr和CHO組大鼠，而與對照組大鼠無明顯差異；第12周結(jié)束后Fat組大鼠血漿瘦素水平明顯高于其他三組；其他組間無明顯差異。第4周和第8周血漿瘦素與體重呈明顯正相關(guān)，而與lee's指數(shù)無明顯相關(guān)性。第12周血漿瘦素不僅與體重呈明顯正相關(guān)，而且與le

8、e's指數(shù)也呈明顯正相關(guān)。 5、下丘腦外周性食欲調(diào)節(jié)激素leptin、insulin受體及中樞性食欲調(diào)節(jié)激素及其受體的變化：Control組大鼠下丘腦瘦素受體基因表達明顯高于其他三組，其他組間比較無明顯差異。雖然Fat組大鼠下丘腦NPY基因表達較其他組升高，胰島素受體、AgRP、和MC-R4基因表達低于其他各組，但均未達統(tǒng)計學差異。Pr組大鼠胰島素受體基因表達低于Control組，而與其他各組間無明顯差異。體重和Lee's指數(shù)呈

9、明顯的正相關(guān)關(guān)系(r=0.83，P=0.00)；體重與下丘腦增食欲素基因表達呈明顯的正相關(guān)關(guān)系(r=0.36，P=0.02)，而Lee's指數(shù)則與下丘腦瘦素受體呈明顯的正相關(guān)關(guān)系(r=0.35，P=0.03)。下丘腦各食欲調(diào)節(jié)激素間也存在明顯的相互作用關(guān)系，表現(xiàn)為下丘腦NPY和AgRP之間存在明顯負相關(guān)；瘦素受體與增食欲素之間呈明顯正相關(guān)；瘦素受體與MC-4R之間也呈明顯正相關(guān)；胰島素受體則分別與瘦素受體、MC-4R、AgRP呈明顯正相

10、關(guān)。 6、下丘腦肥胖相關(guān)基因變化：與對照組相比，高脂飲食喂養(yǎng)大鼠下丘腦共有14個基因表達上調(diào)≥2倍，其中8個為厭食基因，3個為促食欲基因，3個為調(diào)解能量消耗的基因。基因表達下調(diào)≤2倍的共有13個，其中7個為厭食基因，6個為促食欲基因。 結(jié)論： 1、高脂飲食喂養(yǎng)大鼠體重和Lee's指數(shù)較其他飲食方案喂養(yǎng)大鼠明顯增加。高脂飲食可抑制大鼠食欲，但未明顯改變能量攝入。高蛋白質(zhì)飲食有利于維持大鼠體重和Lee's指數(shù)。

11、 2、高脂飲食大鼠血漿leptin水平明顯增高。高脂飲食喂養(yǎng)大鼠血清瘦素變化早于lee's指數(shù)變化。體重和Lee's指數(shù)與血漿leptin水平明顯正相關(guān)，Ghrelin水平則與血漿leptin和胰島素水平呈負相關(guān)。 3、膳食結(jié)構(gòu)改變可對下丘腦食欲調(diào)節(jié)激素及其受體產(chǎn)生影響。對照組大鼠下丘腦瘦素受體基因表達明顯高于其他三組；高蛋白質(zhì)組大鼠胰島素受體基因表達低于對照組。大鼠體重與下丘腦增食欲素基因表達呈明顯的正相關(guān)關(guān)系(r=0.36