黃酮醇類活性提取物整體代謝輪廓及結構分析的質譜方法研究.pdf

1、本論文開展了以黃酮醇類化合物為主要成分，具有抗老年癡呆和抗血栓活性的草棉植物活性提取物AB-8-2在大鼠體內代謝轉化的系統(tǒng)研究。提出了以質譜裂解行為與代謝途徑特征相結合獲取雙重信息且互補參照的研究思路，并將原型成分和代謝產物的結構推斷互相佐證，建立了活性提取物AB-8-2中黃酮醇類化合物在大鼠體內生物轉化的整體代謝輪廓質譜分析方法。同時還比較研究了黃酮醇類單體成分血漿中代謝產物的特征以及黃酮醇苷類化合物在不同CID方式下質譜裂解行為的差

2、異。 主要包括以下四個方面的內容： 1．黃酮醇單糖苷類化合物在不同CID方式下的裂解行為比較選擇有代表性的幾種黃酮醇苷類單體化合物，進行了在ESI-MS<'2>裂解行為的比較研究，探討了3D離子阱、Q TRAP<'TM>型質譜儀的EPI、LIT-MS<'2>譜掃描的三種不同CID方式下糖基化位置對該類化合物裂解行為的影響及其特征性裂解反應，研究發(fā)現不同CID方式將導致以糖基裂解方式為主的特征性差異，糖基丟失產生的苷元離子

3、[Yo-H]<'-·>和苷元離子Y<,0><'->相對強度比值及另一個診斷離子<'0,2>X<,0><'->產生與否與CID方式密切相關。不同類型質譜儀上獲得的化合物結構判斷規(guī)律不能不加以驗證地應用于在其它類型質譜儀上采集的數據。但是，不同原理及類型的MS/MS儀獲得的結果可以提供很有意義的參考價值及補充性的重要信息。 2．草棉植物活性提取物中黃酮醇類成分及其整體代謝輪廓的質譜分析方法研究在前期研究的基礎上，采用高效液相色譜一多

4、級質譜聯用技術(HPLC-MS<'n>)，開展了對AB-8-2及其經灌胃和靜注給藥后大鼠膽汁樣品的系統(tǒng)分析研究。首先從AB-8-2(原型)中分析共檢測到31個黃酮醇類化合物；包括一些極微量且在紫外色譜上沒有吸收峰的黃酮醇雙糖苷和乙?；擒疹惢衔铮⒏鶕﨧s<'n>譜對此進行細致分析，推斷了它們的結構。本研究結合原型組分的質譜裂解規(guī)律和黃酮醇類成分的代謝途徑特征，以不同給藥途徑獲得的大鼠膽汁樣品為研究對象，建立了黃酮醇類混合物及其代謝整

5、體輪廓分析的快速質譜分析方法。運用本研究方法在AB-8-2及大鼠膽汁樣品中共分析鑒別出了58個以槲皮素或山柰酚為母核的硫酸化、甲基化、葡萄糖醛酸化Ⅱ相代謝產物及糖苷原型，其中包括多組同分異構體。本項研究中提出的黃酮醇類化合物原型及其在生物體液中代謝產物多組分的快速、整體輪廓分析的方法，為中藥及天然藥物的復雜活性組分體系的代謝研究提供了一種新的研究思路。 3．大鼠灌胃給予活性提取物AB-8-2后尿液中的代謝物分析研究了大鼠口服給予

6、AB-8-2后尿液中的代謝轉化情況，在一個分析周期內檢測出了灌胃給予AB-8-2后大鼠尿樣中的黃酮醇類成分。共鑒定了51個以槲皮素或山柰酚為母核的Ⅱ相代謝產物及黃酮醇苷元，發(fā)現在尿樣中以槲皮素雙葡萄糖醛酸結合物存在的代謝產物為主要形式。同時與口服給予AB-8-2后膽汁樣品的結果比較分析，發(fā)現兩種生物樣本的代謝產物種類存在很大差異。其中尿樣中發(fā)現的黃酮醇代謝終產物主要是葡萄糖醛酸結合物，且以甲基化槲皮素的單葡萄糖醛酸結合物含量最高，但是沒

7、有觀察到像膽汁中多樣化的代謝反應產物，沒有檢測到乙?；?、硫酸化產物。此外，還發(fā)現AB-8-2中某些黃酮醇雙糖苷類化合物在小腸吸收過程中可保留其中一個糖基，并以次級苷的形式與葡萄糖醛酸結合，隨尿液被排出體外。尿液樣品中一些組分含有共流出的葡萄糖醛酸甲酯結合物，對此，經分析判斷為在樣品處理過程中產生的人工代謝產物。 4．靜脈注射槲皮素及其不同糖苷類化合物后大鼠血漿中的代謝物比較分析對比分析了大鼠靜脈給予槲皮素及其C-7、C-3'、C

8、-3位糖苷取代的4種黃酮醇類化合物后大鼠血漿中的代謝產物，經研究發(fā)現內源性物質在槲皮素母核上加合位點的傾向性；同時表明C-7位的游離羥基對葡萄糖醛酸結合反應具有重要影響。此外，還分析了血漿中檢測不到4'-OH甲基化代謝產物的原因，提出是由于3'-OH被葡萄糖取代后，B環(huán)的鄰二酚羥基結構消失，導致槲皮素-*'-O-葡萄糖苷不能作為兒茶酚甲基轉移酶(COMT)的底物，因此不發(fā)生甲基化代謝反應。進一步闡明了對黃酮醇類化合物而言，只有母核上具有