粉防己堿或與三氧化二砷聯(lián)合對MCF-7細(xì)胞作用的研究.pdf

1、乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率逐漸增高。中醫(yī)藥治療乳腺癌有悠久的歷史，在扶正固本、祛邪、調(diào)動機體抗病能力、減輕其他治療的副作用方面有極其重要作用和獨特優(yōu)勢。 基因芯片技術(shù)以一種綜合、全面、系統(tǒng)的觀點來研究復(fù)雜的生命現(xiàn)象，為后基因組時代的生命科學(xué)研究提供了一種強有力的工具。幾千年來，中醫(yī)外科學(xué)經(jīng)歷了自身的經(jīng)驗積累、理論的形成與發(fā)展、臨床治療方法的建立與完善等過程。學(xué)科體系逐漸成熟，學(xué)科特色更加鮮明，成為中醫(yī)學(xué)的重要組成

2、部分，并受到當(dāng)今中醫(yī)學(xué)整體發(fā)展及西醫(yī)外科學(xué)等學(xué)科的影響。如何采納當(dāng)今生命科學(xué)前沿成果—基因芯片技術(shù)，促進中醫(yī)外科學(xué)的發(fā)展，本研究進行了探索。 粉防己堿是從防己科植物粉防己(StephamiatetrandraS.Moore)的塊根中分離提取的一種雙芐基異喹啉類生物堿，具有直接抑制腫瘤細(xì)胞生長、放療增敏、減輕放、化療毒性反應(yīng)及逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性等多種作用，我們還發(fā)現(xiàn)粉防己堿能夠誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞系凋亡，還發(fā)現(xiàn)有抑制端

3、粒酶的作用。其在腫瘤治療中具有廣闊的應(yīng)用前景。 中藥砒霜主要含有三氧化二砷(AS2O3)，砷化合物在我國作為藥物應(yīng)用已有2400多年的歷史。自從20世紀(jì)90年代，我國學(xué)者應(yīng)用三氧化二砷(As2O3)治療急性早幼粒細(xì)胞性白血病并獲得成功以來，人們對砷化合物進行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)As2O3不僅對各型白血病有效，在治療乳腺癌、肝癌、胃癌、食管癌等方面都有明顯效果。As2O3主要是通過抑制腫瘤細(xì)胞生長和腫瘤新生血管形成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞部分

4、分化和凋亡等發(fā)揮抗腫瘤作用的。 尋找能增強AS2O3的凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)或與AS2O3有協(xié)同作用的藥物近年來引起人們的關(guān)注，目的在于既能降低砷劑的用量、減輕副作用，又能提高其療效、擴大砷劑的治療范圍。以往的臨床及實驗研究表明，粉防己堿與某些化療藥物具有協(xié)同作用，但其機制不明。我們的體外研究表明粉防己堿與AS2O3在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的過程中是否具有明顯的協(xié)同作用，其作用機制和臨床應(yīng)用效果都值得進一步研究，研究兩種藥物單用或合用對MCF-

5、7細(xì)胞的作用具有重要價值。 生長曲線，MTT測定結(jié)果表明粉防己堿、三氧化二砷(As2O3)對乳腺癌細(xì)胞的生長皆有明顯的抑制作用。粉防己堿與三氧化二砷(As2O3)聯(lián)合作用于乳腺癌細(xì)胞時無論是生長曲線或是MTT測定均未比單獨使用時有更強的影響作用，這便提示兩者的聯(lián)合能增強其殺傷能力。 我們在實驗中觀察到粉防己堿作用MCF-7細(xì)胞后，細(xì)胞生長明顯變緩，部分細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、染色質(zhì)濃聚及胞膜起泡現(xiàn)象，部分細(xì)胞胞膜破裂，在其周圍有致

6、密的凋亡小體出現(xiàn)，DNA電泳出現(xiàn)典型的凋亡“梯狀”帶，提示粉防己堿能有效抑制MCF-7細(xì)胞生長，誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。 為研究粉防己堿對乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞毒作用的分子機制，應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測5μg/ml粉防己堿作用于乳腺癌MCF-7細(xì)胞24h后基因表達譜的變化。結(jié)果表明粉防己堿抑制DNA復(fù)制相關(guān)基因(如RPA1，RPA2等)、DNA修復(fù)相關(guān)基因(如XRCC2，XRCC5等)、細(xì)胞周期進程相關(guān)基因(如CDC23，CDC2L5等)、