MMP9和COX2基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的: 結(jié)直腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。自1970年從腫瘤分子生物學(xué)的興起發(fā)展至今，對(duì)結(jié)直腸癌的研究和認(rèn)識(shí)已進(jìn)入了嶄新的階段。結(jié)直腸癌是一類全身性疾病，涉及多個(gè)階段、多條通路和多個(gè)基因的病理過程，并且具有種族分布、家族聚集現(xiàn)象和某些遺傳缺陷等特點(diǎn)。由于生物學(xué)的多樣性、人類的異同性及致癌的多階段性使不同個(gè)體對(duì)致癌物暴露引起作用的敏感性不同。而基因的遺傳多態(tài)性是導(dǎo)致不同個(gè)體對(duì)環(huán)境因素反應(yīng)性的差異的重

2、要原因。SNP作為功能基因組學(xué)的重要組成部分，是人種之間、個(gè)體之間差異的遺傳基礎(chǔ)之一，也是研究腫瘤遺傳易感性的重要策略。并已確定為多種遺傳相關(guān)疾病的易感物質(zhì)基礎(chǔ)，并成為患病危險(xiǎn)程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。正確識(shí)別基因及其等位基因變異體，對(duì)分析探討個(gè)體對(duì)環(huán)境易感因素的敏感性，確定患結(jié)直腸癌的高危人群，以及進(jìn)行患病危險(xiǎn)程度的評(píng)價(jià)，建立有效的預(yù)警系統(tǒng)均具有重要意義。 基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類鋅依賴的內(nèi)分泌多態(tài)酶，通過降解細(xì)胞外基質(zhì)增強(qiáng)腫瘤

3、的侵襲能力，并且影響腫瘤細(xì)胞的行為，從而導(dǎo)致腫瘤的演進(jìn)。MMP9是MMPS家族成員之一，可降解基底膜的主要成分Ⅳ型膠原蛋白，已有研究表明MMP9與結(jié)直腸癌的演進(jìn)相關(guān)。因此，研究其基因變異，特別是單核苷酸多態(tài)性，并開展病例對(duì)照研究，有助于揭示MMP9基因與結(jié)直腸癌遺傳易感性的關(guān)系，還將引導(dǎo)和推動(dòng)相關(guān)治療藥物的研發(fā)，指導(dǎo)個(gè)體化預(yù)防和治療。MMP9基因存在單核苷酸多態(tài)，其中啟動(dòng)子區(qū)-1562C>T和編碼區(qū)279R>Q多態(tài)近年來倍受關(guān)注。

4、 環(huán)氧合酶(COX)又稱為環(huán)氧化酶和PG內(nèi)過氧化物合成酶。COX的主要功能是將花生四烯酸轉(zhuǎn)變成前列腺素(PG)。COX家族主要有兩個(gè)亞型，分別是環(huán)氧合酶1 (COX1)和環(huán)氧合酶2(COX2)。PG參與體內(nèi)的許多生理和病理過程，高水平的PG特別是PGE2對(duì)多種癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。因此，作為合成PGE2過程中主要的限速酶，COX家族對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要的調(diào)節(jié)作用。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)COX2在結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重

5、要的作用。 本文應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，通過病例對(duì)照研究探討MMP9基因-1562C>T，279R>Q多態(tài)，及COX2基因-765G>C多態(tài)對(duì)結(jié)直腸癌易感性的貢獻(xiàn)。 材料與方法: 實(shí)驗(yàn)對(duì)象為137位結(jié)直腸癌患者和199位正常人。137位原發(fā)性結(jié)直腸癌患者采自中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科和沈陽市肛腸醫(yī)院2005年至2006年住院手術(shù)患者，病理診斷明確。全組平均年齡為61

6、.29歲，其中男性71例，女性66例。詳細(xì)記錄腫瘤臨床病理學(xué)參數(shù)，TNM分期參照UICC癌癥分期標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)選取199名與病例組同期的健康體檢者作為對(duì)照組，平均年齡為60.65歲，其中男性104例，女性95例，入組條件要求既往無腫瘤病史，并否認(rèn)有腫瘤家族史。以上所有受檢對(duì)象均為中國沈陽地區(qū)無血緣個(gè)體，在抽取外周血DNA標(biāo)本前均知情同意，并自愿參加本項(xiàng)研究。關(guān)于風(fēng)險(xiǎn)因素包括吸煙(吸煙者定義為每日吸煙1支以上，其余為不吸煙者)，飲酒(飲酒者定

7、義為每日飲酒50g以上，其余為不飲酒者)，BMI(根據(jù)WHO對(duì)亞洲人群BMI的分類建議，18.5至23kg/m2為正常體重，等于或高于23kg/m2為超重和肥胖)的詳細(xì)信息均通過問卷調(diào)查完成。采用PCR-RFLP法檢測(cè)病例組和對(duì)照組MMP9及COX2基因的三個(gè)多態(tài)的基因型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0軟件進(jìn)行非條件Logistic回歸分析，用OR值和95％CI值估計(jì)研究因素對(duì)疾病危險(xiǎn)度的貢獻(xiàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 一、MMP9基

8、因-1562C>T和279R>Q多態(tài)性與結(jié)直腸癌的易感性 結(jié)直腸癌患者組的MMP9-1562C>T和279 R>Q基因型頻率與對(duì)照組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析MMP9-1562C>T和279 R>Q基因型頻率與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性時(shí)發(fā)現(xiàn)，MMP9-1562C>T多態(tài)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022)，CT+TT基因型的結(jié)直腸癌患者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但與年齡、性別，腫瘤TNM分期及漿膜侵犯無關(guān)。同樣，

9、279 R>Q基因型頻率與性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤TNM分期及漿膜侵犯無關(guān)，但發(fā)現(xiàn)在年齡低于60歲的結(jié)直腸癌患者中MMP9 279RR+RQ基因型相對(duì)于QQ基因型比例較高。 二、 COX2基因-765G>C多態(tài)性與結(jié)直腸癌的易感性 結(jié)直腸癌患者組的COX2-765G>C基因型頻率與對(duì)照組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同樣，-765G>C基因型頻率與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但吸煙和BMI改變了COX2-765G>C

10、多態(tài)和結(jié)直腸癌之間的風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)現(xiàn)吸煙可增加結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，與不吸煙人群相比，吸煙人群中的-765GG基因型攜帶者患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)增高。本研究中沒有發(fā)現(xiàn)飲酒和結(jié)直腸癌的發(fā)生存在正相關(guān)性。根據(jù)BMI狀況將研究對(duì)象分層后，發(fā)現(xiàn)-765GG基因型與結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與正常BMI(18.5-22.9)相比，超重者(BMI 23-24.9)患結(jié)直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增高3.909倍，肥胖者(BMI>25)患結(jié)直腸癌風(fēng)險(xiǎn)增高2.031倍。