TLR4基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)是近年來發(fā)現(xiàn)的跨膜信號傳遞受體，作為重要的模式識別受體（PRRs）在多種疾病中起著重要的作用。機(jī)體對疾病的易感性往往受到基因多態(tài)性的影響。本研究通過病例-對照研究的方法，試討論TLR4基因rs1927914和rs10759932兩個位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide ploymorphisms SNP）與結(jié)直腸癌(Colorectal Cancer

2、 CRC)發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性，為CRC高危人群的篩檢及診治提供有利的分子生物學(xué)依據(jù)。
　　方法:選取2012年2月-2014年2月間就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院的68例結(jié)腸癌患者，143例直腸癌患者和132例健康人群做病例-對照研究。符合條件的實驗對象分別采集靜脈血約5ml，記錄年齡、性別、吸煙、飲酒、家族史等信息。采用蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取白細(xì)胞中的DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測反應(yīng)(Polymerase Chai

3、nReaction-ligase detection reaction，PCR-LDR)方法對TLR4基因的rs1927914C/T和rs10759932C/T兩個SNP位點(diǎn)等位基因及基因分型進(jìn)行檢測。
　　應(yīng)用SPSS13.0軟件(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用x2檢驗及t檢驗分別對年齡、性別、抽煙、飲酒及腫瘤家族史加以分析，以P=0.05為檢驗水準(zhǔn)，P＜0.05

4、有統(tǒng)計學(xué)意義。采用x2對對照組基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡分析。采用x2檢驗對實驗組與對照組之間的基因型和等位基因型分布加以分析比較。單體型頻率和連鎖不平衡分析采用EH軟件和2LD軟件(1.2 version，RockefellerUniversity，New York)。應(yīng)用非條件Logistic回歸法計算表示相對風(fēng)險度的比值比(odds ratio，OR)及95％可信區(qū)間(confidence interval，C

5、I)。
　　結(jié)果:
　　1對照組中-2026 rs1927914C/T和-1607rs10759932C/T兩個位點(diǎn)的基因型頻率分布都符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。
　　2 TLR4基因rs1927914C/T多態(tài)性與CRC發(fā)病風(fēng)險相關(guān)性分析
　　TLR4基因rs1927914C/T位點(diǎn)上等位基因C和T在結(jié)腸癌組中出現(xiàn)頻率為47.1％和52.9％，直腸癌組中出現(xiàn)頻率為38.8％和61.2％

6、，在對照組中為41.3％和58.7％，兩組分別相比，認(rèn)為結(jié)腸癌和對照組，直腸癌和對照組的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P分別為0.270和0.554）。如Table3、4所示在結(jié)腸癌組中C/C、C/T、T/T三種基因型出現(xiàn)的頻率分別20.6％、52.9％和26.5％，直腸癌組中C/C、C/T、T/T三種基因型出現(xiàn)的頻率分別13.3％、51.0％和35.7％，而在正常對照組中分別為17.4％、47.7％和34.8％，兩組分別與對照組相比較，差異均

7、無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.479和0.626)。分別與野生T/T基因型相比，C/C基因型和C/T基因型與結(jié)腸癌的發(fā)生無相關(guān)性(OR=0.643，95％CI=0.272-1.518; OR=0.685，95％ CI=0.346-1.543)，與直腸癌的發(fā)生也無明顯相關(guān)(OR=1.342，95％CI=0.649-2.776; OR=0.957,95％ CI=0.568-1.613)。
　　3 TLR4基因rs10759932C/T多態(tài)

8、性與CRC發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性分析:
　　TLR4基因rs10759932C/T位點(diǎn)上等位基因C和T在直腸癌組中出現(xiàn)頻率為30.8％和69.2％，在結(jié)腸癌組中出現(xiàn)頻率為35.3％和65.7％，在正常對照組中為29.5％和70.5％。直腸組和結(jié)腸癌組分別與對照組比較，C和T等位基因差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.747和P=0.238)。如Table5、6所示C/C、C/T和T/T三種基因型出現(xiàn)的頻率在結(jié)腸癌中分別為7.4％、55.9％和36

9、.8％，在直腸癌中分別為12.6％、36.4％和51％，而在正常對照組中則為17.4％、25.3％和59.1％，結(jié)腸癌組與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。而直腸組與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.059)，與野生T/T基因型相比，攜帶C/T基因型可能會降低結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險(OR=0.261,95％CI=0.136-0.503; OR=0.558,95％CI=0.323-1.065), C/C基因型與CRC的發(fā)病風(fēng)

10、險無關(guān)OR=1.474，95％CI=0.507-4.285; OR=1.196，95％CI=0.597-2.395)。
　　4采用EH軟件和2LD軟件對結(jié)腸癌組和對照組中TLR4基因rs1927914C/T和rs10759932C/T兩SNPs位點(diǎn)進(jìn)行聯(lián)合分析。顯示(Table7) TLR4基因rs1927914C/T與rs10759932C/T兩位點(diǎn)間存在連鎖的不平衡現(xiàn)象(D'=0.994)，單體型rs1927914T-rs10

11、759932T是最多見的，在健康對照組中和結(jié)腸癌組中的頻率分別為51.9％，56.9％;其次為rs1927914T-rs10759932C(43.3％,39.2％); rs1927914C-rs10759932T(7.0％,3.9％)和rs1927914C-rs10759932C(0％，0％)。人群中rs1927914T-rs10759932C單體型降低結(jié)腸癌發(fā)病風(fēng)險(OR=0.846，95％CI=0.506～0.914)。其它單體型的

12、OR值分別為1.250(95％CI=0.952～2.075)、0.716(95％CI=0.209～2.449)、0.406(95％CI=0.009～18.820)，表明此三種單體型可能與結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。
　　對直腸癌組和對照組中TLR4基因rs1927914C/T和rs10759932C/T兩位點(diǎn)SNPs聯(lián)合分析，顯示(Table8)TLR4基因rs1927914C/T與rs10759932C/T兩位點(diǎn)間存在連鎖的不平衡現(xiàn)象

13、(D'=0.993)。四種單體型的OR值和95％CI分別為0.598(95％CI=0.653～1.605)、1.331(95％CI=0.519～3.413),1.024(95％CI=0.653～1.605)、0.913(95％CI=0.579～1.439)，表明此四種單體型可能與直腸癌的發(fā)病風(fēng)險無相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1 TLR4基因C-2026T(rs1927914) SNP可能與CRC的發(fā)病風(fēng)險無相關(guān)性。
　　

14、2 TLR4基因-1607(rs10759932) SNP與結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險存在相關(guān)性。攜帶C/T基因型可能會降低結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險。
　　3結(jié)腸癌組和對照組中TLR4基因rs1927914與-rs10759932SNPs位點(diǎn)間存在連鎖不平衡(D'=0.994)。rs1927914T-rs10759932C單體型降低結(jié)腸癌發(fā)病風(fēng)險。其它單體型可能與結(jié)腸癌發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。直腸癌組和對照組rs1927914C/T和rs10759932C/