SHR116958的非臨床藥代動力學研究.pdf

1、本研究的目的是系統(tǒng)地研究SHR116958在大鼠與比格犬體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程，闡明SHR116958及其主要代謝物體內(nèi)藥動學特征，為藥物的藥效、毒理評價及臨床新藥報批提供資料，也為其他此類化合物的藥代動力學研究提供參考和新思路。
　　 本研究的主要內(nèi)容包括：
　　 一、建立測定生物樣品中SHR116958及其代謝物的方法
　　 建立LC/MS/MS方法測定血漿中SHR116958及其代謝物的濃度，并進

2、行方法學確證，包括方法的特異性、靈敏度、準確度、定量線性范圍、日內(nèi)及日間精密度、回收率等。同樣，針對不同生物樣本，在LC/MS/MS方法的基礎上，修訂和優(yōu)化藥物提取方法，建立各種重要組織器官勻漿、糞、尿、膽汁等生物樣本中SHR116958藥物濃度的測定方法。
　　 二、SHR116958及其代謝物的血藥濃度.時間曲線及吸收
　　 1、大鼠體內(nèi)藥代動力學
　　 大鼠：選擇一個劑量進行單次口服給藥的藥物代謝動力學研究

3、，并選擇一個劑量進行靜脈注射，計算口服給藥在大鼠體內(nèi)的生物利用度。
　　 2、比格犬體內(nèi)藥代動力學
　　 ①測定單次口服給藥高中低3個劑量的血藥濃度-時間圖形和相關(guān)參數(shù)，確定是否存在AUC和Cmax依賴于成正比增高的線性藥代動力學，還是非線性藥代動力學采血時間點定為給藥前、給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24h；②選擇一個劑量進行口服連續(xù)7天給藥，每天1次，連續(xù)7天，比較第1天和第

4、7天時的血藥濃度曲線，確定是否存在藥物誘導代謝消除速率的加快或抑制，使藥代動力學行為隨給藥次數(shù)而變化；③采用自身交叉設計，選擇清洗期后的中劑量組比格犬在同等劑量進行單次靜脈注射，測定血藥濃度-時間圖形和相關(guān)參數(shù)，用此計算口服給藥在比格犬體內(nèi)的生物利用度。
　　 三、SHR116958在大鼠體內(nèi)的分布
　　 選擇1個劑量組，每個點6只大鼠進行口服給藥，在藥物的吸收、血藥濃度達峰、消除等3-4個時間點處死，解剖，提取心、肝、

5、腦、脾、肺、腎、胃、腸、肌肉、脂肪、生殖腺等重要組織、器官進行藥物提取和LC/MS/MS藥物濃度測定，比較SHR116958在各組織器官中的分布，有無靶向性，獲取血腦屏障的通過情況等。
　　 四、SHR116958的代謝方式及主要代謝產(chǎn)物
　　 采用SHR116958與空白人血漿、肝微粒體酶系統(tǒng)孵育的體外試驗方法，確定此藥可能存在的代謝方式及主要代謝產(chǎn)物。并考察SHR116958在人、猴、犬、大鼠4種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)

6、定性和代謝種屬差異，為體內(nèi)藥動學研究、安全性評價、藥效學評價實驗選擇合適的動物模型提供依據(jù)。
　　 五、SHR116958在大鼠體內(nèi)的排泄
　　 糞尿和膽汁排泄研究：選擇1個劑量口服給藥進行糞、尿和膽汁排泄研究。
　　 六、血漿蛋白結(jié)合試驗
　　 選擇高中低3個劑量濃度的藥物分別與空白大鼠、比格犬、人血漿、人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白等孵育，采用超過濾法，結(jié)合LC/MS/MS測定，研究SHR116958

7、與不同種屬動物血漿蛋白的結(jié)合情況，為臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　 七、SHR116958的毒代動力學研究
　　 試驗設高、中、低和3個劑量組，劑量分別為10、30、60 mg·kg-1，每組6只動物，雌雄各半。采用口服給藥，1次/天，連用30天，共給藥30次，給藥期限為4周半，研究SHR116958在比格犬體內(nèi)是否存在蓄積，以及其與劑量之間的關(guān)系。
　　 本研究的主要結(jié)果包括：
　　 一、生物樣品中SHR

8、116958及其代謝物的LC/MS/MS方法學建立和確證
　　 本研究建立了快速、靈敏、易操作的LC/MS/MS法測定大鼠、犬血漿以及大鼠組織等生物樣品中的SHR116958及其代謝物的濃度。用鹽酸坦洛新為內(nèi)標，血漿樣品經(jīng)乙酸乙酯萃取，以甲醇：乙腈：0.1％甲酸水溶液=50:25:25（v/v/v）為流動相，Angilent Eclipse C18柱進行分離，以高純氮氣作為Curtain gas，collision gas ES

9、I源正離子掃描，MRM掃描方式進行檢測。測定犬血漿中SHR116958及Ml的線性范圍為1.12-3360 ng·mL-1。血漿中SHR116958及M1最低定量限為1.12 ng·mL·-1；大鼠血漿中SHR116958及M1的線性范圍為2.71-5560 ng.mL-1，最低定量限為2.71 ng·mL-1。本方法專屬性好，準確、快速。適用于SHR116958及其代謝物的臨床藥代動力學研究。
　　 二、SHR116958及其

10、代謝物的血藥濃度-時間曲線及吸收
　　 1、SHR116958及其代謝物在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學
　　 大鼠靜脈注射SHR116958后迅速被水解代謝為M1，檢測不到其它代謝產(chǎn)物，而且M1的血漿藥物濃度明顯高于同時間點的原形SHR116958濃度；靜脈注射后血漿中SHR116958及代謝物M1藥物濃度隨時間的變化而迅速下降，呈典型的二項指數(shù)型曲線，而且SHR116958及代謝物M1藥物濃度變化規(guī)律基本一致，大多數(shù)個體的

11、血藥濃度可檢測至24h。
　　 SD大鼠口服SHR116958給藥的血藥濃度與靜脈給藥相比有大幅降低，8倍于靜脈注射劑量口服后，SHR116958和代謝物M1血藥的峰濃度僅是靜脈注射的8.8％和5.4％，而且吸收不規(guī)則，多有雙峰現(xiàn)象，表明大鼠口服SHR116958后吸收很低。
　　 SD大鼠按4.5 mg·kg-1劑量靜脈注射給藥和按36 mg·kg-1劑量口服給藥后原形藥SHR116958的主要動力學參數(shù)。
　　

12、 SD大鼠按照4.5 mg·kg-1劑量靜脈注射給藥和按照36 mg·kg-1劑量口服給藥后代謝物M1的主要動力學參數(shù)如下。
　　 SD大鼠口服SHR116958后SHR116958的生物利用度為9.4％，代謝物M1的生物利用度為4.98％，表明大鼠口服SHR116958后吸收很差。
　　 2、SHR116958及其代謝產(chǎn)物在比格犬體內(nèi)的藥代動力學研究
　　 比格犬連續(xù)多次口服SHR116958后第1次給藥的藥

13、代參數(shù)及與第7次給藥的藥代參數(shù)均無明顯差異，SHR116958的蓄積因子AUCd7/AUCd1為0.94，活性代謝物M1的蓄積因子AUCd7/AUCd1為1.0，表明多次給藥后，SHR116958與其代謝物在比格犬體內(nèi)基本無明顯蓄積情況。
　　 三、SHR16958及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的組織分布
　　 SD大鼠36 mg`kg-1口服給藥SHR116958后，SHR116958的含量按AUC排序由大到小依次為：肝、胃、

14、脾、腎、肺、脂肪、胸腺、卵巢、骨髓、心臟、睪丸、肌肉、血漿、腦。其中在肝的含量最高，胃次之，說明SHR116958經(jīng)由肝臟代謝，主要分布并作用于靶器官胃，符合其作為胃動力藥的特征；其次，通過腦中藥物濃度極低可以推斷此藥不易通過血腦屏障?？诜o藥后血漿中原形藥濃度較低，表明大鼠口服給藥后存在明顯的首過效應；藥物作用的靶點胃組織中藥物濃度也非常高，可能是SHR116958被胃組織直接吸收相關(guān)。SHR116958水解活性產(chǎn)物M1按AUC排序由

15、大到小依次為：胃、肝、肺、腎、卵巢、血漿、脾、脂肪、骨髓、心臟、睪丸、肌肉、胸腺、腦。胃中代謝物濃度最高，說明原形藥SHR116958及其水解后的主要活性產(chǎn)物M1大部分分布于主要靶器官胃，分布規(guī)律與原形藥大體一致，而與莫沙必利不一致。
　　 四、SHR116958的代謝方式及主要代謝產(chǎn)物
　　 體外代謝孵育試驗表明，SHR116958的代謝具有CYP依賴性，主要由CYP催化代謝。而SHR116958對CYP2C9，CYP

16、2C19，CYP2D6，CYP2E1沒有明顯抑制作用，對CYP1A2，CYP3A4的IC50值均大于10μM，根據(jù)文獻資料，IC50>10μM屬于較弱的抑制：1μM　　 五、SHR116958及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的排泄
　　 SHR116958主要以水解活性產(chǎn)物M1的形式通過膽汁排泄，少量以原形藥的

17、形式排泄。24h內(nèi)膽汁以原形和代謝物M1的形式的累計排出量分別達到給藥量的3.2％和0.27％，24h時膽汁中以原形和代謝物Ml的形式累及排出的量為3.5％，與最終從糞便排泄量相當。
　　 六、SHR116958及其代謝產(chǎn)物的血漿蛋白結(jié)合
　　 SHR116958及其水解活性產(chǎn)物M1與人血漿、大鼠血漿和犬血漿蛋白結(jié)合率在97-99％之間，種屬之間血漿蛋白結(jié)合差別不大，略高于人血清白蛋白（HSA）的結(jié)合率，表明SHR116

18、958及其水解活性產(chǎn)物M1除與血漿中的主要結(jié)合蛋白白蛋白結(jié)合外，還有少部分可能與其它結(jié)合蛋白如α1-酸性糖蚩白、脂肪、蛋白結(jié)合，同時說明SHR116958及其代謝產(chǎn)物M1主要與血漿中的白蛋白結(jié)合。
　　 七、SHR116958及其代謝產(chǎn)物的毒代動力學
　　 比格犬口服SHR116958后SHR116958、代謝物M1血藥濃度隨劑量的加大而增高，第1次與第30次相同時間點的血藥濃度經(jīng)配對t-檢驗后，大部分時間點血藥濃度的差