人源基因載體對杜氏肌營養(yǎng)不良和血友病B基因治療的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　本文的研究內(nèi)容包括兩部分： 第一部分：人源載體介導(dǎo)的微小肌營養(yǎng)不良蛋白治療DMD的研究。首先以肌肉組織cDNA為模版用PCR的方法擴增了dystrophin的部分序列構(gòu)建成minidystrophin基因，與EGFP基因融合后連入核糖體靶向性載體pHrneo，將得到的pHrnDysG載體轉(zhuǎn)入Cos-7細胞觀察其表達，然后再將載體轉(zhuǎn)入DMD患者的成肌細胞中觀察其表達情況。所構(gòu)建的pHrnDysG載體轉(zhuǎn)入Cos-7細胞后觀察到綠

2、色熒光可以定位于細胞膜上，將DMD患者的肌肉組織原代培養(yǎng)后得到了成肌細胞，pHrnDysG載體轉(zhuǎn)入成肌細胞后可見熒光表達?！　〉诙糠郑喝嗽摧d體介導(dǎo)的凝血因子Ⅸ在肝細胞中的表達的研究。將已構(gòu)建的pHrnF9載體利用電轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入人肝細胞系HL-7702，經(jīng)G418篩選，鑒定出定點整合克隆，用RT-PCR、ELISA檢測凝血因子Ⅸ的表達。在1.5×106細胞中找到了一個定點整合克隆，ELISA檢測FIX表達量為106ng/106細胞/

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