黏液填充在消化道上皮微缺損及腸屏障功能作用的研究.pdf

1、目的：小腸上皮細胞由隱窩基底部的干細胞不斷生成并在絨毛頂端脫落，這一過程形成腸上皮單層細胞間的微缺損（epithelial gaps）。然而，生理狀態(tài)下，97％的gaps被非通透性的物質所填充，從而維持了腸上皮的屏障功能。但究竟被什么物質所填充，目前尚不清楚。腸道被覆黏液主要是由杯狀細胞分泌的一種糖蛋白，其主要成分Muc2是含致密結構的大分子O-糖基化膠樣黏蛋白，對黏膜上皮起保護和潤滑作用，抵抗病原微生物及其他有害物質對黏膜的損傷。無菌

2、的致密的內黏液層是阻止腸道細菌與上皮細胞接觸的重要的物理屏障，研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)患者，隨著內黏液層的破壞，細菌入侵到原本無菌的內黏液層。黏液的厚度及性質在UC的發(fā)病機制中起重要作用。共聚焦激光顯微內鏡(Confocal Laser Endomicroscopy，CLE)是先進的內鏡檢查技術，擁有組織學水平的分辨率和放大優(yōu)勢，可以清楚觀察上皮細胞結構及亞細胞結構，并被譽為“光學活檢”。既往

3、研究通過CLE可以觀察到人類回腸末端和直腸上皮中存在與單個上皮細胞大小相似的gaps結構。本研究旨在探討?zhàn)ひ菏欠駞⑴c填充上皮微缺損，并進一步評價黏液填充上皮微缺損在局部腸屏障功能中的作用。
　　方法：自2014年6月至2014年12月，取就診于山東大學齊魯醫(yī)院消化內科行共聚焦腸鏡檢查的UC患者及對照者的回腸末端組織，用卡諾氏液(Carnoy'ssolution)固定過夜，常規(guī)石蠟切片后行過碘酸雪夫AB-PAS染色，并行免疫組化方法

4、和免疫熒光方法觀察gaps及Muc2黏蛋白表達分布情況。另外，分析了自2013年1月至2014年12月至我院行CLE檢查的UC患者和對照者的CLE回腸末端圖片，選取圖像清晰病例，共有39例UC患者及34例對照者共聚焦圖像納入本研究。運用改良Watson分級方法，Ⅱ級為功能性缺損，表現(xiàn)為單個細胞脫落伴熒光素滲出;Ⅲ級為結構性缺損，表現(xiàn)為大片細胞脫落，伴上皮熒光素滲漏。評價WatsonⅡ/Ⅲ gaps缺損周長占所觀察視野絨毛周長的百分比，用

5、以評估回腸末端局部腸屏障功能。并分析兩組之間杯狀細胞占所觀察視野絨毛上皮細胞數(shù)目的百分比，用以評估分泌黏液的杯狀細胞在兩組之間是否有變化。
　　結果：在熒光顯微鏡及光學顯微鏡下，均觀察到黏液參與了填充上皮微缺損，且UC患者上皮微缺損未被黏液填充率增加，兩組之間有統(tǒng)計學意義(27.52(25，29.68)vs12.27(9.7816.67)，p＜0.001）。CLE下可清晰辨認杯狀細胞和gaps結構，另外，分析CLE下回腸末端圖像發(fā)

6、現(xiàn)，UC患者存在明顯的局部腸屏障功能障礙，兩組之間有統(tǒng)計學意義(5.33(3.48，6.62) vs0.27(0.00，0.69)，p＜0.001);且UC患者分泌黏液的杯狀細胞數(shù)目占上皮細胞數(shù)目的比率明顯降低，兩組之間有統(tǒng)計學意義(17.38(16.00，19.87) vs23.44(20.24，26.18)，p＜0.001）。對上皮微缺損(％)與杯狀細胞(％)進行Spearman秩相關分析，兩組之間呈顯著負相關（r=-0.74，p＜