基于cDNA-AFLP的茉莉酸甲酯刺激的三七不定根轉(zhuǎn)錄輪廓研究.pdf

1、三七是一種重要的傳統(tǒng)中草藥，具有活血化瘀、鎮(zhèn)靜止痛、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等多重功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究揭示三七具有廣泛的藥理活性和廣闊的應(yīng)用前景。由于栽培限制因素多、細(xì)胞或組織培養(yǎng)尚無商業(yè)應(yīng)用，三七的產(chǎn)量供不應(yīng)求。代謝工程生產(chǎn)活性成分是三七研發(fā)的重要突破口之一，然而其成功應(yīng)用取決于對(duì)這些活性成分生物合成途徑及其調(diào)控機(jī)制的深入認(rèn)識(shí)。由于缺乏基因組學(xué)數(shù)據(jù)，SAGE、microarray等常用的基因表達(dá)研究工具在非模式植物中難以應(yīng)用，而cDNA-AFLP因不

2、需要事先知道基因組序列信息，特別適合于遺傳背景資料缺乏的非模式植物的基因表達(dá)分析及新基因的發(fā)掘。 在茉莉酸甲酯刺激下，三七不定根主要活性成分三萜皂苷含量提高。為了深入探索三七中三萜皂苷生物合成機(jī)制，本研究用茉莉酸甲酯刺激三七不定根，考察了影響三七不定根的cDNA-AFLP反應(yīng)體系的各個(gè)關(guān)鍵因素，包括總RNA提取、雙鏈cDNA的合成、內(nèi)切酶組合用量和反應(yīng)時(shí)間、連接接頭用量、預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增模板稀釋倍數(shù)、選擴(kuò)增引物的濃度等，建立了