氧化型和還原型巨噬細胞在DSS誘導的小鼠實驗性腸炎中的作用.pdf

1、炎癥性腸病炎(inflammatoryboweldisease，IBD)是一組病因不明的慢性腸道炎癥性疾病，免疫功能紊亂在其發(fā)病機制中占主導地位。而巨噬細胞在IBD的免疫機制中的作用尤為重要。IBD患者腸道炎癥中滲透的大量炎癥細胞包括巨噬細胞和中性粒細胞產(chǎn)生的反應性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)不僅將炎癥腸道暴露于氧化應激之中，同時導致了組織損傷。胃腸道粘膜自身有一些抗氧化防御系統(tǒng)，主要是還原型谷胱甘肽(GS

2、H)，可以通過中和連續(xù)生成的ROS抵消其損害的影響，在一些動物模型中GSH對保護胃腸道粘膜細胞抵抗氧化應激起著重要的作用。大量研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在IBD病人和實驗性腸炎中包括GSH在內(nèi)的抗氧化劑水平的降低。巨噬細胞可根據(jù)細胞內(nèi)GSH的含量分為兩種類型，即GSH含量高的還原型巨噬細胞(reductivemacrophages，RMp)和含少量GSH的氧化型巨噬細胞(oxidativemacrophages，OMp)。以往研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，克羅恩病(

3、CD)是RMp/Th1反應類型，而OMp/Th2型則與炎癥細胞在局部的聚集有關(guān)。而對于DSS誘導的實驗性腸炎病變局部及免疫細胞內(nèi)GSH的變化及其與粘膜損傷及細胞因子分泌的關(guān)系尚不明確。本實驗旨在研究DSS(DextranSodiumSulphate，硫酸葡聚糖鈉)誘導的小鼠實驗性腸炎病變局部GSH的變化及其與粘膜損傷及細胞因子分泌的關(guān)系，并進一步研究該IBD模型中腹腔巨噬細胞內(nèi)GSH，GSSG的變化及其與細胞因子分泌、粘膜損傷的關(guān)系，并

4、探討巨噬細胞類型在該型腸炎發(fā)生、發(fā)展中的作用及影響。 一、DSS誘導的小鼠腸炎模型病變結(jié)腸局部的GSH變化及其與病變局部分泌的IFN-γ，IL-4及粘膜損傷的關(guān)系方法實驗組小鼠給予含5％DSS的蒸餾水自由飲用7天之后處死，分離出的病變結(jié)腸一部分評價其病理學改變并用GSH1抗體做免疫組化，另一部分結(jié)腸培養(yǎng)后檢測其IL-4、IFN-γ的表達。結(jié)果DSS誘導實驗性腸炎小鼠口服5％的DSS溶液7天出現(xiàn)體重減輕、腹瀉、血便等急性腸炎的表現(xiàn)

5、。病理學切片HE染色發(fā)現(xiàn)小鼠病變結(jié)腸腺體結(jié)構(gòu)紊亂，粘膜和粘膜下單核細胞和多核細胞浸潤。DSS組病變腸段局部GSH表達較對照組減少(分別為2±0.6，3.14±1.0)，病變結(jié)腸分泌的IL-4明顯升高(分別為38.7±4.7，28.7±6.7，P＜0.05)，IFN-γ輕度降低(分別為20.6±7.4，23.2±5.6，P＞0.05)。結(jié)論DSS誘導的實驗性腸炎小鼠病變結(jié)腸局部GSH的減少與病變結(jié)腸局部分泌的細胞因子IL-4增加、IFN-

6、γ下降以及粘膜損傷相關(guān)。 二、DSS誘導的小鼠腸炎模型巨噬細胞內(nèi)GSH/GSSG的變化與IFN-γ，IL-4及腸道局部炎癥損傷的關(guān)系。 方法實驗組小鼠給予含5％DSS的蒸餾水自由飲用7天之后處死，采集腹腔巨噬細胞，檢測腹腔巨噬細胞內(nèi)GSH與GSSG的變化。分離出的病變結(jié)腸一部分評價其病理學，另一部分結(jié)腸及脾臟培養(yǎng)后檢測其IL-4、IFN-γ的表達。結(jié)果DSS誘導的實驗性腸炎小鼠腹腔巨噬細胞中的GSH較對照組降低，而GSS