18F-FDG和18F-FLT細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)早期評(píng)價(jià)放療對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 建立18F-FDG和18F-FLT與人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549結(jié)合實(shí)驗(yàn)的方法學(xué)。通過(guò)18F-FDG和18F-FLT細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)，早期評(píng)價(jià)放療對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的抑制作用。
　　 方法：
　　 (1)在不同條件下測(cè)定肺非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549攝取18F-FDG和18F-FLT的細(xì)胞結(jié)合率：細(xì)胞數(shù)量為5×104～5×106/每孔；反應(yīng)時(shí)間20min～1

2、20min;18F-FDG和18F-FLT的放射性活度為1.85～29.6KBq;葡萄糖濃度為0～11.1mmol/L時(shí)。用γ測(cè)量?jī)x測(cè)量細(xì)胞的CPM計(jì)數(shù)(B)及上清液的CPM計(jì)數(shù)(F)。計(jì)算18F-FDG和18F-FLT的細(xì)胞結(jié)合率(％)=[B／(B+F)]。
　　 (2)對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞進(jìn)行單純照射，改變不同的照射劑量（2、4、6、8Gy），計(jì)算照射后24h和48h18F-FDG和18F-FLT的細(xì)胞結(jié)合抑制率。

3、r>　　 (3)采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測(cè)定不同照射劑量(2、4、6、8Gy)作用于A549細(xì)胞24h和48h后觀察OD值并計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。(4)通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，不同照射劑量(2、4，6、8Gy)作用于A549細(xì)胞24h和48h后細(xì)胞周期的變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)當(dāng)18F-FDG和18F-FLT放射性活度分別為3.7KBq，反映時(shí)間為100min，細(xì)胞數(shù)量分別為5×104、1×105、5×1

4、05、1×106和5x106/每孔時(shí)，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合率分別為(7.65±1.05)%、(13.83±1.02)%、(21.76±1.35)%、(39.83±0.81)%、(41.43±1.86)%，18F-FLT細(xì)胞結(jié)合率分別為(4.95±0.42)%、(6.64±1.36)%、(12.86±0.88)%、(18.76±0.70)%、(21.49±1.52)%；其中18F-FDG組1×106組與5×106組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

5、P＞0.05)，余各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。18F-FLT組5×104組與1×105組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，余各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量為1×106，反應(yīng)時(shí)間為20、40、60、80、100、120min時(shí)，18F-FDG和18F-FLT放射性活度分別為3.7KBq，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合率分別為(15.16±1.27)%、(19.27±1.43)%、(26.71±1.35)%、(2

6、9.35±1.66)%、(39.83±0.81)%，(40.41±2.28)%，18F-FLT細(xì)胞結(jié)合率分別為(5.54±1.28)%、(9.36±1.25)%、(11.52±1.62)%、(14.12±2.75)%、(18.76±0.70)%、(20.52±1.89)%;18F-FDG組20min和40min、60min和80min、100min和120min組之間比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，余各組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜

7、0.05);18F-FLT組40min和60min、100min和120min之間比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），余各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量為1×106，反應(yīng)時(shí)間為100min，放射性活度為1.85、3.7、7.4、14.8、29.6KBq時(shí)，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合率分別為(35.61±3.14)%、(39.83±0.81)%、(37.35±3.44)%、(36.83±2.93)%、(38.12±3.25)

8、%，18F-FLT細(xì)胞結(jié)合率分別為(16.72±1.96)%、(18.76±0.70)%、(17.62±1.34)%、(18.39±1.02)%、(17.56±2.13)%；不同的18F-FDG和18F-FLT放射性活度的細(xì)胞結(jié)合率各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量為1×106，反應(yīng)時(shí)間為100min，放射性活度為3.7KBq，葡萄糖濃度為0、2.78、5.55、11.1mmol/L，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合率分別為(3

9、7.47±1.54)%、(7.39±2.05)%、(5.13±1.36)%、(3.38±1.69)%,18F-FLT細(xì)胞結(jié)合率分別為(17.51±1.35)%、(16.38±1.82)%、(16.42±2.03)%、(17.87±0.93)%。18F-FDG組細(xì)胞結(jié)合率隨著葡萄糖濃度的增高而降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05）。18F-FLT各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (2)18F-FDG細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)，經(jīng)不

10、同劑量(2、4、6、8Gy)的射線照射后24h和48h18F-FDG的細(xì)胞結(jié)合抑制率分別為(1.28±1.04)%、(3.01±1.66)%、(3.27±1.83)%、(6.32±3.22)%和(3.93±2.17)%、(5.97±2.65)%、(9.46±2.03)%、(13.38±1.88)%；經(jīng)照射24h后2Gy組與4Gy組,4Gy組和6Gy組之間細(xì)胞結(jié)合抑制率無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），余各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05

11、)。48h后2Gy組與4Gy組之間細(xì)胞結(jié)合抑制率無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），余各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。18F-FLT細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)，經(jīng)不同劑量(2、4、6、8Gy)的射線照射后24h和48h18F-FLT細(xì)胞結(jié)合抑制率分別為(4.14±4.36)%、(12.53±3.35)%、(19.44±3.14)%、(28.29±6.03)%和(3.16±2.27)%、(8.42±4.59)%、(12.70±3.55)%、(15.

12、54±2.11)%；經(jīng)照射24h后各組間細(xì)胞結(jié)合抑制率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05),48h后6Gy組和8Gy組之間細(xì)胞結(jié)合抑制率無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），余各組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　 (3)MTT實(shí)驗(yàn)，非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞經(jīng)不同的照射劑量(2、4、6、8Gy)照射后24h和48h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為(12.95±0.92)%、(13.26±2.67)%、(17.02±1.32)%、(20.80±0.

13、88)%和(17.72±1.64)%、(28.27±1.32)%、(32.52±0.95)%、(34.57±1.48)%，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨放射劑量的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)而增高；照射后24h，2Gy組與4Gy組之間細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），余各組之間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；照射后48h，各組之間細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)，非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞經(jīng)不同的

14、照射劑量(2、4、6、8Gy)照射后24h和48h細(xì)胞周期S期所占的百分比分別是32.76%、31.28%、18.55%、11.48%、3.18%和l2.29%、11.26%、11.03%、10.97%、10.19%。G2期在整個(gè)細(xì)胞周期中所占百分比分別為37.29%、42.19%、48.11%、65.59%、79.99%和37.85%、40.27%、44.01%、44.50%、55.04%。
　　 結(jié)論：
　　 1、在

15、一定條件下A549細(xì)胞18F-FDG和18F-FLT的結(jié)合率隨細(xì)胞數(shù)量的增多、作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增高，與放射性活度無(wú)關(guān)；A549細(xì)胞與18F-FDG結(jié)合率隨葡萄糖濃度的增高而降低，18F-FLT的結(jié)合率與葡萄糖濃度無(wú)關(guān)。
　　 2、不同的放射劑量作用于非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞24h和48h后18F-FDG和18F-FLT細(xì)胞結(jié)合抑制率隨著照射劑量的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增高，且結(jié)果與MTT法測(cè)定的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率呈正相關(guān)。