豬瘟病毒SPA協(xié)同凝集試驗及雙夾心ELISA檢測方法的建立.pdf

1、本研究通過PK-15細胞增殖豬瘟石門系強毒F114株(CSFV-F114)，通過制備犢牛睪丸細胞增殖豬瘟中國兔化弱毒C株(HCLV)。HCLV株病毒液經(jīng)反復凍融后利用聚乙二醇6000濃縮并純化，得到純度較高的HCLV。將濃縮純化的病毒液分別免疫家兔和豬，制備了兔抗HCLV及豬抗HCLV的高免血清，經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、透析除鹽后，獲得了兔抗HCLV及豬抗HCLV免疫球蛋白IgG的粗提物。 依據(jù)金黃色葡萄球菌細胞壁上的A蛋白(SPA)

2、的特性，用富含A蛋白的金黃色葡萄球菌國際標準株(CowanI)標記兔抗HCLV及豬抗HCLV高免血清，建立了診斷豬瘟的SPA平板協(xié)同凝集試驗。用不同稀釋度的抗血清制備SPA診斷液進行協(xié)同凝集試驗，兔抗HCLV原倍血清，豬抗HCLV陽性血清2倍稀釋所得診斷液效果最理想。對兩種血清標記的SPA診斷液的靈敏度進行對比，兔抗HCLVSPA診斷液抗原的最高檢出濃度為：1:32，豬抗HCLVSPA診斷液抗原的最高檢出濃度為：1:64。與對流免疫電泳

3、檢測到1:2倍稀釋的抗原相比，該方法敏感性較高。通過對發(fā)病動物各臟器靈敏度的檢測，證明在臨床運用SPA協(xié)同凝集法檢測豬瘟的診斷中淋巴結和脾臟為最佳檢測部位。此外，該操作簡便、快速，節(jié)省材料，無需特殊儀器，是一種適用于基層豬場對豬瘟的快速診斷和流行病學調查的新技術。 利用兔抗HCLVIgG，豬抗HCLVIgG及羊抗兔酶標抗體，建立了雙夾心ELISA用于檢測CSFV抗原的免疫學方法。試驗確定的兔抗HCLVIgG，豬抗HCLVIgG及

4、酶標抗體的最佳使用濃度分別為1:40，1:200，1:400。經(jīng)敏感性試驗、特異性阻斷及交叉試驗、重復性試驗，結果表明該檢測方法具有敏感性高、特異性強、重復性好的優(yōu)點。是一種適用于實驗室確診豬瘟病毒的方法。 應用本研究建立的兩種檢測CSFV抗原的方法對50例臨床樣本進行了檢測。SPA協(xié)同凝集試驗檢出陽性樣本6份，陽性檢出率12﹪，4～7min內即可觀察到結果；雙夾心ELISA檢出陽性樣本10份，陽性檢出率20﹪，所需時間約24h