吲哚美辛和埃羅替尼單獨(dú)或聯(lián)用對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、研究目的：觀察表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal growth factor receptor）抑制劑埃羅替尼（Erlotinib，ERL）和COX(Cyclooxygenase)抑制劑吲哚美辛（Indomethacin,IND）單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，初步探討兩藥對(duì)胰腺癌細(xì)胞細(xì)胞周期改變、細(xì)胞增殖和凋亡過程的影響；以及對(duì)胰腺癌新生血管生成的調(diào)節(jié)作用，旨在闡明吲哚美辛和表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑埃羅替尼單獨(dú)或聯(lián)用對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)

2、的抑制作用及其機(jī)制。 研究方法： 1.MTT法檢測(cè)不同濃度、不同時(shí)間IND或（和）ERL對(duì)人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞活力和增殖的影響。 2.流式細(xì)胞分析、透射電鏡和TUNEL法檢測(cè)用藥前后細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的變化。 3.RT-PCR檢測(cè)藥物作用前后BxPC-3細(xì)胞EGFR、COX-2、VEGF、以及凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bak mRNA的表達(dá)；Western blot法檢測(cè)BxPC-

3、3細(xì)胞COX-2和EGFR蛋白的表達(dá)情況。 4.建立人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3裸鼠移植瘤模型，應(yīng)用IND或（和）ERL藥物干預(yù)后動(dòng)態(tài)觀察腫瘤的生長(zhǎng)曲線和瘤重，計(jì)算抑瘤率。 5.對(duì)移植瘤組織進(jìn)行HE染色觀察腫瘤形態(tài)，免疫組化法檢測(cè)移植瘤組織中COX-2和EGFR的變化；免疫組化染色標(biāo)記移植瘤新生血管Ⅷ因子抗原，計(jì)算腫瘤組織微血管密度（MVD）。RT-PCR法檢測(cè)IND和ERL對(duì)移植瘤組織VEGF mRNA表達(dá)的影響。TUN

4、EL法研究裸鼠移植瘤組織腫瘤細(xì)胞的凋亡。 6.應(yīng)用小管形成實(shí)驗(yàn)研究IND或（和）ERL對(duì)體外血管生成的影響。 研究結(jié)果： 1.IND和ERL對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)隨著藥物劑量增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，當(dāng)IND聯(lián)合ERL時(shí)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用更為明顯。 2.透射電鏡、流式細(xì)胞分析以及TUNEL法檢測(cè)均表明IND組和ERL組細(xì)胞凋亡比例和凋亡指數(shù)（AI）明顯增加；與對(duì)照組比較，IND或ERL單獨(dú)用藥可

5、以使細(xì)胞阻滯于G0/G1期，而聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡和周期阻滯更為明顯。 3.應(yīng)用IND及ERL干預(yù)后可見BxPC-3細(xì)胞COX-2和EGFR mRNA表達(dá)的減少，兩藥聯(lián)用時(shí)COX-2和EGFR mRNA下調(diào)更為顯著。Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞COX-2和EGFR蛋白的表達(dá)也得到相似的結(jié)果。不同濃度IND和ERL對(duì)BxPC-3細(xì)胞Bcl-2、Bcl-xl mRNA表達(dá)均有抑制作用, IND對(duì)Bax mRNA的表達(dá)影響不明

6、顯，而ERL組和聯(lián)合用藥組的Bax mRNA表達(dá)較對(duì)照組有輕微上調(diào)。 4.胰腺癌裸鼠移植瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，給予ERL或（和）IND藥物干預(yù)4周后，ERL組抑瘤率為74.5％，IND組抑瘤率為67％，聯(lián)合組抑瘤率為82.2％。 5.RT-PCR和免疫組織化學(xué)染色法顯示藥物干預(yù)組移植瘤組織COX-2、EGFR mRNA和蛋白表達(dá)均較對(duì)照組下調(diào)，TUNEL法顯示藥物干預(yù)組腫瘤凋亡細(xì)胞明顯增多，凋亡指數(shù)（AI）高于對(duì)照組；ERL組和

7、聯(lián)合組裸鼠移植瘤組織bax mRNA表達(dá)上調(diào)。 6.小管形成實(shí)驗(yàn)顯示ERL和IND能抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞體外形成中空閉合管狀結(jié)構(gòu)，而聯(lián)合用藥組對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞小管形成抑制更為明顯。ERL和（或）IND干預(yù)后移植瘤組織MVD較對(duì)照組顯著下降。在體內(nèi)或體外實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)ERL和（或）IND干預(yù)后，胰腺癌BxPC-3細(xì)胞或裸鼠移植瘤組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）mRNA的表達(dá)均受到顯著抑制。 主要結(jié)論和意義：IND和（或）ERL在

8、體內(nèi)、體外對(duì)胰腺癌的生長(zhǎng)均呈負(fù)向調(diào)節(jié)作用，且IND和ERL對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)表現(xiàn)出協(xié)同抑制作用，提示COX-2信號(hào)與EGFR信號(hào)之間可能有交互作用。藥物對(duì)腫瘤的抑制可能通過改變促凋亡基因和抑凋亡基因之間的平衡，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的凋亡，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，下調(diào)促血管生成因子VEGF的表達(dá)，抑制胰腺腫瘤新生血管的生成來實(shí)現(xiàn)的。提示COX-2抑制劑聯(lián)合EGFR抑制劑可能是胰腺癌輔助化療手段中及其有希望和前景的治療策略之