以端粒酶為靶點(diǎn)的AD治療策略的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文以端粒酶為靶點(diǎn)的AD治療策略的體外實(shí)驗(yàn)研究姓名：孔令平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：汪華僑20090530通過(guò)提高端粒酶活性延緩細(xì)胞的衰老。基于以上發(fā)現(xiàn)，本課題利用已構(gòu)建的hTERT基因重組腺病毒載體(AdhTERT)轉(zhuǎn)染人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元，觀察外源性hTERT是否對(duì)Afl2535誘導(dǎo)的人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用及可能機(jī)制。然后利用端粒酶活性陽(yáng)性的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH—SY5Y構(gòu)建SA

2、D胞質(zhì)雜交細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)它們?cè)谂囵B(yǎng)過(guò)程中線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的變化，此變化對(duì)內(nèi)源性端粒酶活性的影響以及雌激素干預(yù)后對(duì)hTERTmRNA表達(dá)的影響，以探討端粒酶在氧化應(yīng)激狀態(tài)中可能的作用和影響。本課題的完成將為探索以端粒酶為靶點(diǎn)的AD基因治療策略提供基礎(chǔ)性資料。材料與方法1端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)Apzs3s誘導(dǎo)的人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元損傷的神經(jīng)保護(hù)作用分離和培養(yǎng)12“20周齡人胚胎皮質(zhì)神經(jīng)元，AdhTERT基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)hTE

3、RT的表達(dá)。轉(zhuǎn)染后第3d天給予10I_tmol／LA陀s3s作用24h，MTT檢測(cè)細(xì)胞活力，熒光探針DCFHDA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平，GSH檢測(cè)試劑盒(比色法)測(cè)定細(xì)胞勻漿中GSH含量。2po細(xì)胞和SAD胞質(zhì)雜交細(xì)胞的構(gòu)建與鑒定采用sHSY5Y細(xì)胞作為母細(xì)胞進(jìn)行po細(xì)胞的構(gòu)建，在培養(yǎng)基中加入51tg／ml和75ttg／ml溴化乙錠長(zhǎng)期作用SHSY5Y，第10周左右開(kāi)始行透射電鏡觀察線粒體形態(tài)變化和用PCR法擴(kuò)增mtDNA編碼的目的基因細(xì)