ID1在涎腺腺樣囊性癌發(fā)生發(fā)展中的作用及功能.pdf

1、腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)是口腔頜面部常見(jiàn)的唾液腺惡性腫瘤之一，它浸潤(rùn)性極強(qiáng)，術(shù)后易復(fù)發(fā)，是頭頸部最具破壞性和不可預(yù)見(jiàn)性的腫瘤[1]。因而尋找有效的治療靶標(biāo)對(duì)于改善涎腺腺樣囊性癌的治療及預(yù)后至關(guān)重要。
　　DNA結(jié)合抑制因子1（inhibitor of DNA binding1，ID1）,該基因可編碼螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（HLH），HLH蛋白可抑制DNA結(jié)合及轉(zhuǎn)錄激活能力，在細(xì)胞生長(zhǎng)、衰老

2、和分化等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。研究表明，在多種腫瘤中都有發(fā)現(xiàn)ID1基因的異常表達(dá)，ID1發(fā)揮著類(lèi)似于癌基因的作用，參與了腫瘤的生長(zhǎng)、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移。本課題通過(guò)基因測(cè)序和生物學(xué)信息分析發(fā)現(xiàn)涎腺腺樣囊性癌的差異表達(dá)基因ID1，進(jìn)而研究ID1在涎腺腺樣囊性癌發(fā)生發(fā)展中的作用及功能。研究分為兩個(gè)部分，分述如下：
　　一、涎腺腺樣囊性癌差異表達(dá)基因篩選及其臨床意義
　　目的：篩選涎腺腺樣囊性癌中差異表達(dá)基因并分析其臨床意義。

3、r>　　方法：對(duì)涎腺腺樣囊性癌高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞（SACC-M、SACC-2）提取細(xì)胞總RNA，送至蘇州眾信生物有限公司采用第二代基因測(cè)序技術(shù)進(jìn)行RNA測(cè)序,對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行生物學(xué)信息分析，篩選SACC細(xì)胞的差異表達(dá)基因。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)ID1在SACC細(xì)胞中的表達(dá)量，驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。通過(guò)收集68例涎腺腺樣囊性癌組織和50例對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織標(biāo)本，采用免疫組化染色實(shí)驗(yàn)研究ID1在涎腺腺樣囊性癌臨床樣本中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：基

4、因測(cè)序結(jié)果顯示ID1在SACC-M細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于SACC-2。GO富集分析顯示SACC-M相對(duì)SACC-2表達(dá)上調(diào)的基因大部分都是和細(xì)胞移動(dòng)黏附能力相關(guān)的基因，包括基因ID1。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示ID1在SACC-M中的表達(dá)明顯高于 SACC-2。免疫組化染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 ID1在涎腺腺樣囊性癌組織樣本中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織的樣本。
　　結(jié)論：ID1在涎腺腺樣囊性癌中特異性高表達(dá)，且與涎腺腺樣囊性癌的高轉(zhuǎn)移有關(guān)。

5、
　　二、 ID1對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　目的：研究ID1對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移能力的影響。
　　方法：Real-time PCR檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染SACC-M細(xì)胞后ID1的表達(dá)情況。采用CCK-8法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)研究ID1表達(dá)被抑制后SACC-M細(xì)胞增殖能力的變化。分別使用Transwell細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)研究ID1表達(dá)下調(diào)后SACC-M細(xì)胞遷移及侵襲能力的變化。
　　結(jié)果

6、：Real-time PCR結(jié)果顯示siRNA干擾后ID1在SACC-M中的表達(dá)量下降。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明siRNA干擾組SACC-M細(xì)胞增殖能力明顯弱于陰性對(duì)照組。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示siRNA干擾ID1的表達(dá)后，SACC-M細(xì)胞增殖能力隨之下降。Transwell細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，ID1表達(dá)下調(diào)后，SACC-M細(xì)胞的遷移、侵襲能力也隨之下降。
　　結(jié)論：ID1對(duì)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞（SACC-M）的增殖、侵