一顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系BIGH3基因的突變檢測(cè).pdf

1、目的：對(duì)一顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良(GCD)家系的臨床特點(diǎn)進(jìn)行觀察并對(duì)其行BIGH3基因的突變篩查,進(jìn)而確定其致病基因并探討其致病機(jī)制。
　　方法：收集一臨床診斷為GCD的家系,共13名成員,包括4例患者和9例非患者,繪制家系遺傳圖譜,分析該家系發(fā)病特點(diǎn)。對(duì)該家系中GCD患者行視力、裂隙燈顯微鏡、角膜熒光素鈉染色等眼部常規(guī)檢查以觀察其臨床表現(xiàn),獲得患者及家系成員知情同意后,抽取該家系患者、家族正常成員以及隨機(jī)選取的50名正常對(duì)照者的外周

2、靜脈血,經(jīng)典酚氯仿法提取基因組DNA,參考文獻(xiàn)報(bào)道的3對(duì)突變熱點(diǎn)引物,利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增已準(zhǔn)確定位克隆的BIGH3基因的目的片段,PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序檢測(cè),測(cè)序結(jié)果采用DNAstar軟件進(jìn)行序列分析,以篩選突變位點(diǎn)。
　　結(jié)果：1.家系中所有患者經(jīng)裂隙燈檢查均查見角膜有異常物質(zhì)沉積,角膜沉積物形態(tài)不完全相同,符合角膜營(yíng)養(yǎng)不良病程進(jìn)展的表現(xiàn)。2.家系遺傳特點(diǎn)為垂直下傳,連續(xù)三代傳遞,男女患病率均等,符合常染色體顯性的遺

3、傳。3.家系中所有患者均檢測(cè)出第4外顯子的R124H突變(CGC>CAC),即371位的堿基G被A替換,進(jìn)而導(dǎo)致其編碼的精氨酸被突變型組氨酸替代。而家系中的正常者及50例正常對(duì)照者的BIGH3基因中均未發(fā)現(xiàn)該突變。4.家系成員都檢測(cè)出第11、12外顯子的同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。5.通過基因檢測(cè),確定該家系角膜營(yíng)養(yǎng)不良的分型,即為GCD II型,又稱Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良(ACD)。
　　結(jié)論：BIGH3基因第4外顯子的