一顆粒狀角膜營養(yǎng)不良家系BIGH3基因的突變檢測.pdf

1、目的：對一顆粒狀角膜營養(yǎng)不良(GCD)家系的臨床特點進行觀察并對其行BIGH3基因的突變篩查,進而確定其致病基因并探討其致病機制。
　　方法：收集一臨床診斷為GCD的家系,共13名成員,包括4例患者和9例非患者,繪制家系遺傳圖譜,分析該家系發(fā)病特點。對該家系中GCD患者行視力、裂隙燈顯微鏡、角膜熒光素鈉染色等眼部常規(guī)檢查以觀察其臨床表現(xiàn),獲得患者及家系成員知情同意后,抽取該家系患者、家族正常成員以及隨機選取的50名正常對照者的外周

2、靜脈血,經(jīng)典酚氯仿法提取基因組DNA,參考文獻(xiàn)報道的3對突變熱點引物,利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增已準(zhǔn)確定位克隆的BIGH3基因的目的片段,PCR產(chǎn)物進行直接測序檢測,測序結(jié)果采用DNAstar軟件進行序列分析,以篩選突變位點。
　　結(jié)果：1.家系中所有患者經(jīng)裂隙燈檢查均查見角膜有異常物質(zhì)沉積,角膜沉積物形態(tài)不完全相同,符合角膜營養(yǎng)不良病程進展的表現(xiàn)。2.家系遺傳特點為垂直下傳,連續(xù)三代傳遞,男女患病率均等,符合常染色體顯性的遺

3、傳。3.家系中所有患者均檢測出第4外顯子的R124H突變(CGC>CAC),即371位的堿基G被A替換,進而導(dǎo)致其編碼的精氨酸被突變型組氨酸替代。而家系中的正常者及50例正常對照者的BIGH3基因中均未發(fā)現(xiàn)該突變。4.家系成員都檢測出第11、12外顯子的同義單核苷酸多態(tài)性(SNP)。5.通過基因檢測,確定該家系角膜營養(yǎng)不良的分型,即為GCD II型,又稱Avellino角膜營養(yǎng)不良(ACD)。
　　結(jié)論：BIGH3基因第4外顯子的