脫脂對(duì)異體松質(zhì)骨免疫原性和成骨能力的影響.pdf

1、目的： 研究脫脂對(duì)同種異體松質(zhì)骨免疫原性和成骨能力的影響，并探討其可能的影響機(jī)制。 方法： 1.動(dòng)物模型建立。移植骨供體：Lewis和Fisher344大鼠各15只；移植受體：Fisher344大鼠30只。受體大鼠隨機(jī)分為2組：同基因移植組和同種異基因移植組。行雙側(cè)股部肌囊袋骨塊移植。分別于術(shù)后2、4、8周每組處死5只大鼠，檢測(cè)體外淋巴細(xì)胞二次刺激增殖指數(shù)和CD4+/CD8+比值，并對(duì)移植骨塊行組織學(xué)觀察。

2、 2.移植骨制備。60只Lewis大鼠作為松質(zhì)骨塊供體，獲取的骨塊隨機(jī)分為ABCD4組，分別采用4種不同程序進(jìn)行處理，檢測(cè)處理后骨塊內(nèi)總脂肪和總蛋白含量，掃描電鏡觀察骨塊縱剖面結(jié)構(gòu)。 3.移植后免疫反應(yīng)檢測(cè)。48只Fisher344大鼠作為移植受體，根據(jù)移植骨塊的不同隨機(jī)分為4組，每組12只，行雙側(cè)股部肌囊袋松質(zhì)骨塊移植。術(shù)后1、2、4、8周每組處死3只大鼠，檢測(cè)刺激增殖指數(shù)、CD4+/CD8+比值及細(xì)胞因子IL-2、INF-

3、γ、IL-4水平，取出骨塊行大體和組織學(xué)觀察。對(duì)術(shù)后4周時(shí)各組的免疫反應(yīng)指標(biāo)(增殖指數(shù)和CD4+/CD8+比值)同相應(yīng)骨塊總脂肪含量行Spearman相關(guān)回歸分析。 4.移植后成骨能力檢測(cè)。12只Fisher344大鼠作為移植受體，根據(jù)移植骨塊不同隨機(jī)分為4組，每組3只，行股骨下干骺端骨缺損填充術(shù)。于取材前14天和4天對(duì)大鼠分別行雙熒光標(biāo)記；術(shù)后8周時(shí)行移植部位X線檢查，并對(duì)標(biāo)本大體觀察，不脫鈣切片后行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析，同時(shí)

4、行Goldner和甲苯胺藍(lán)染色，觀察組織學(xué)變化。 結(jié)果： 1.同種異基因移植組各時(shí)間點(diǎn)增殖指數(shù)、CD4+/CD8+比值均比同基因移植組高，且于術(shù)后4周時(shí)達(dá)到峰值，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，同種異基因移植組血管長(zhǎng)入和新骨形成速度低于同基因移植組。 2.總脂肪含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，骨塊內(nèi)，總脂肪含量為A組＞B組＞C組＞D組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；4種處理程序?qū)偟鞍缀繜o明顯影響

5、。超聲清洗結(jié)合化學(xué)方法(D組)能徹底去除骨塊內(nèi)脂肪成份(總脂肪含量為0.09％)。掃描電鏡觀察示各組骨塊骨小梁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)完整，D組骨塊骨小梁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)尤為清晰，骨小梁間未見細(xì)胞和組織碎屑?xì)埩簟?3.對(duì)移植術(shù)后增殖指數(shù)及CD4+/CD8+比值測(cè)定發(fā)現(xiàn)：同一時(shí)間點(diǎn)各組水平均為A組＞B組＞C組＞D組，且均于術(shù)后4周時(shí)達(dá)到峰值。術(shù)后4周時(shí)除C、D組間外其余組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；細(xì)胞因子IL-2、INF-γ水平在術(shù)后早期均呈升高

6、趨勢(shì)，4周時(shí)達(dá)到峰值，但各時(shí)間點(diǎn)組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；IL-4水平各時(shí)間點(diǎn)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。組織學(xué)觀察示移植早期各組骨塊周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度：A組＞B組＞C組＞D組；D組在術(shù)后4周時(shí)有血管長(zhǎng)入，8周時(shí)有明顯新骨形成。各組骨塊總脂肪含量同移植術(shù)后4周時(shí)增殖指數(shù)、CD4+/CD8+比值行相關(guān)回歸分析，結(jié)果示二者呈正相關(guān)(P＜0.05)。 4.各組術(shù)后8周時(shí)X線均示骨缺損界線模糊，移植骨同受體骨融合。不脫

7、鈣骨切片熒光顯微鏡下觀察，均可見雙色平行熒光帶。影像分析系統(tǒng)測(cè)定骨礦化速率示D組最大，同其他各組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Goldner和甲苯胺藍(lán)染色示各組均有新骨形成，D組新骨形成最明顯。 結(jié)論： 1.本研究所建動(dòng)物模型可用來進(jìn)行異體松質(zhì)骨移植免疫原性的研究。 2.總脂肪含量可作為提示異體骨移植后免疫反應(yīng)強(qiáng)弱的一個(gè)指標(biāo)。 3.脫脂可有效降低異體松質(zhì)骨移植后免疫反應(yīng)，并提高移植后的成骨能力。