轉化生長因子-β1基因+869T-C位點單核苷酸多態(tài)性與心房顫動相關性研究.pdf

1、心房顫動（房顫）是臨床上最常見心律失常，是引起腦卒中、心力衰竭及死亡的重要原因，其人群發(fā)病率隨年齡的增加而增加，但其發(fā)病機理至今還不甚清楚。因此在早期階段診斷和治療房顫，對預防頑固性房顫和心血管事件的發(fā)生有著重要意義。目前，纖維化在心血管疾病中的作用正成為研究的熱點。纖維化是絕大多數心臟病理學改變的重要組成部分。近年來細胞因子在纖維化性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中的作用引起人們的重視，特別是轉化生長因子-β（Transforming growt

2、h factor-beta，TGF-β），被認為是關鍵的致纖維化因子，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的細胞外基質沉積促進劑。其中TGF-β1是最早被認識的TGF-β亞型，在纖維化過程中，TGF-β1可使細胞外基質蛋白過度表達，使心臟的組織、結構、形狀發(fā)生改變。這些改變影響了心室收縮能力、瓣膜功能、電沖動傳導。研究表明，心房纖維化是房顫維持和發(fā)展的病理生理基礎，TGF-β1在心房纖維化的發(fā)生及調控方面有非常重要的作用，可作為治療房顫的新的靶點。隨著基因

3、組測序的進展，全面深入地了解個體和群體間基因組的變異或多態(tài)性已成為可能，并且日益顯示其重要性。因此，進一步研究TGF-β1基因單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）與房顫的關系，從而針對TGF-β1進行房顫等纖維化性疾病的基因治療，研究開發(fā)新的治療纖維化的藥物，對減慢或阻止纖維化進一步發(fā)展并最終攻克房顫等纖維化性疾病成為可能。 研究目的： 我們通過采取病例對照的研究方法，應

4、用現(xiàn)代分子生物學技術，對TGF-β1基因+869T/C位點SNP進行檢測，從而了解TGF-β1基因+869T/C位點SNP與中國華南地區(qū)漢族人群心房顫動關聯(lián)性的情況，從而在分子水平探索遺傳因素在中國華南地區(qū)漢族人群心房顫動發(fā)病中的作用機制。 研究對象： 全部研究對象均來自2006年9月～2008年11月廣東省多家醫(yī)院心內科住院病人共212例。房顫組入選標準：（1）經體表心電圖或動態(tài)心電圖監(jiān)測確診為房顫。（2）年齡≤75歲

5、，體重指數（BMI）≤28。（3）排除以下疾?。汗铝⑿苑款?、預激綜合征、瓣膜性心臟病、先心病、肺部疾病、心肌病、心肌炎、甲狀腺功能異常、肝腎疾病、胸科大手術后、心包炎、糖尿病、血液病、電解質紊亂、血栓栓塞疾病、結締組織疾病和自身免疫性疾病等。（4）所有患者均無長期飲酒嗜好，女性無正在妊娠或口服避孕藥史；肝功能、血糖、胸片、腹部B超（包括肝、膽、脾、胰、雙腎及腎上腺）等檢查正常。對照組入選標準：經病史詢問及體表心電圖或動態(tài)心電圖監(jiān)測證實從

6、未發(fā)生過房顫符合以上標準的患者。以上研究對象均為華南地區(qū)漢族人群（無血緣關系），且已獲知情同意。 根據以上標準，共入選房顫患者103例，年齡平均（62.13±6.79）歲，其中男性59例，女性44例，合并高血壓49例，合并冠心病54例（其中36例同時患高血壓及冠心?。?；選取對照組109例，年齡平均（61.64±7.63）歲，其中男性64例，女性45例，合并高血壓51例，合并冠心病58例（其中42例同時患高血壓及冠心病）。

7、 方法： 研究對象均建立臨床資料觀察表，詳細記錄患者姓名、性別、年齡、身高、體重、吸煙等一般情況；TC、TG、HDL-C、LDL-C、LAD、LVEF等檢查指標；以及高血壓、冠心病、糖尿病等病史。 所有受試者清晨空腹采靜脈血，EDTA抗凝，采用寶生物工程（大連）有限公司血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。TGF-β1的基因型采用序列特異性引物聚合酶鏈反應檢測。 統(tǒng)計分析： 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件

8、分析。計量資料符合正態(tài)分布的以均數±標準差表示，計數資料以頻數表示。遺傳平衡檢驗采用Hardy-Weinberg平衡定律。計數資料組間比較采用X2檢驗。正態(tài)分布計量資料的組間比較經方差齊性檢驗，多樣本均數比較方差齊性者采用one-way ANOVA，組間多重比較采用LSD法；兩樣本間均數比較方差齊者采用獨立樣本的t檢驗，方差不齊者采用t’檢驗。偏態(tài)分布的計量資料轉化為正態(tài)分布資料后進行處理，如無適當的轉化方式則采用非參數檢驗，兩組比較采

9、用Wilcoxon秩和檢驗，多組比較采用Kruskal-Wallis H檢驗。用單變量logistic回歸分析探討基因多態(tài)性與房顫發(fā)生的關系，計算優(yōu)勢比（odds ratio，OR）及95%可信區(qū)間（95% confidence interval，95% CI）。檢驗水準α=0.05。 結果： 1.TGF-β1基因+869T/C位點SNP在中國華南地區(qū)漢族人群中存在，且存在3種基因型。2%瓊脂糖凝膠電泳分析的結果：TGF

10、-β1基因+869T/C位點PCR擴增產物，1為TT基因型，2為TC基因型，3為CC基因型。 2.房顫組與對照組的計量資料均符合正態(tài)分布。房顫組與對照組之間的年齡、性別、體重指數（BMI）、吸煙、高血壓及冠心病構成比、高血壓合并冠心病、HDL-C、LDL-C、TG、TC無顯著性差異。P值分別為0.627、0.833、0.772、0.412、0.587、0.753、0.327、0.194、0.909、0.731。而房顫組與對照組之

11、間的LVEF、LAD有顯著性差異，P值分別為0.000、0.000。房顫組LVEF明顯低于對照組。房顫組LAD明顯大于對照組。 3.房顫組TGF-β1基因+869T/C位點TT、TC及CC型頻率分布與對照組比較有顯著性差異（x2=8.772，P=0.012）。房顫組TGF-β1基因+869T/C位點CC型頻率分布高于對照組。房顫組TGF-β1基因+869T/C位點等位基因頻率分布與對照組比較有顯著性差異（X2=8.967，P=0

12、.003）。房顫組+869T/C位點C等位基因頻率分布高于對照組。 4.單變量logistic回歸分析TGF-β1基因+869T/C位點基因多態(tài)性與房顫的關系，相對TT基因型而言，TC+CC基因型與突變純合子CC型，OR值（95% CI）分別為1.862（1.013～3.421）、3.043（1.421～6.518），P值分別為0.045、0.004，提示TC+CC基因型與突變純合子CC型是房顫的危險因素。TC雜合型的OR值（9

13、5%CI）為1.430（0.744～2.749），P=0.284。TGF-β1+869T/C位點基因C等位基因對房顫的相對危險度，相對T等位基因而言，OR值（95% CI）為1.797（1.223～2.642），P=0.003。 5.不同基因型左房直徑之間的比較采用方差分析，三種基因型的左房直徑的方差分析F值為5.186，P值為0.006。三種基因型的左房直徑有顯著性差異。左房直徑兩種基因型之間的比較采用LSD-t檢驗，TT基因

14、型與TC、CC基因型左房直徑水平存在統(tǒng)計學差異，P分別為0.009和0.013，而TC基因型與CC基因型之間左房直徑水平差異無顯著性，P為0.967。TC基因型與CC基因型的左房直徑明星高于TT基因型。 結論： 1.TGF-β1基因+869T/C位點SNP存在于中國華南地區(qū)漢族人群中。 2.TGF-β1基因+869T/C位點SNP與中國華南地區(qū)漢族人群房顫的發(fā)生有明顯的相關性，T等位基因是房顫發(fā)生的保護基因，C等