輻照對蝦過敏原生化性質(zhì)及抗原性的影響.pdf

1、食物過敏作為食源性疾病的一種已引起了人們的普遍關(guān)注.根據(jù)流行病學調(diào)查,美國每年約有2﹪～2.5﹪的人發(fā)生食物過敏,兒童及嬰幼兒的發(fā)病率約5﹪～8﹪.澳洲每年有600例過敏性疾病發(fā)生,并且在2004年食品企業(yè)的召回產(chǎn)品中,過敏食品比例就達47﹪.據(jù)不完全統(tǒng)計,我國的發(fā)病率也較高.近年來,有關(guān)食源性蝦過敏的報道屢見不鮮.在聯(lián)合國糧農(nóng)組織提出的八大類引起過敏的食物之中,蝦與蟹等甲殼類動物及其制品是重要的一類.最近韓國、德國以及加拿大等國報道,

2、輻照技術(shù)可促進過敏原蛋白質(zhì)的降解、交聯(lián)和分子構(gòu)象的改變,破壞其抗原決定簇,有可能成為降低食物過敏反應(yīng)的技術(shù)手段.為了探索過敏原輻照脫敏的機理,本研究以中國海蝦過敏原TM(Tropomyosin)為研究對象,對不同存在狀態(tài)的過敏原(提取液、凍干粉和全蝦)做輻照處理,分析其輻照的生化效應(yīng);利用電泳技術(shù)純化的微量過敏原免疫動物制備高效價高特異性抗體,在此基礎(chǔ)上分析其輻照免疫學效應(yīng),探討過敏原的輻照免疫學分子機理,為我國食品輻照脫敏技術(shù)的研究提

3、供理論依據(jù). 蝦是引起過敏反應(yīng)的重要食物之一,研究發(fā)現(xiàn)原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是蝦中一種主要過敏原,這是一種分子量為36kDa的熱穩(wěn)定性蛋白.據(jù)Lee YK和Myung-Woo Byun等報道輻照可破壞其抗原表位,降低其致敏性.本研究利用過敏原的熱穩(wěn)性及低鹽離子溶液中可溶性,成功地對過敏原作了常規(guī)提純.在此基礎(chǔ)上研究了不同劑量的輻照處理對不同存在狀態(tài)的過敏原TM的分子結(jié)構(gòu)、疏水性、濁度等生化性質(zhì)的影響,證實輻照

4、改變了過敏原TM水溶性、疏水性,過敏原分子發(fā)生了解聚、交聯(lián)等反應(yīng),進而改變了其生物學特性. 為了進一步了解輻照對過敏原致敏性的影響,在比較利用不同方法提純的過敏原蛋白質(zhì)做免疫原免疫動物制備抗體的優(yōu)劣前提下,設(shè)計利用SDS-PAGE純化的蝦過敏原(TM)成功地制備出過敏原TM的高效價高特異性多克隆抗體,結(jié)合人血清過敏原抗體IgE,研究了不同劑量的輻照處理對不同存在狀態(tài)的過敏原與患者特異性血清抗體IgE及多抗的親和性的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn)

5、:沸水處理后過敏原溶液與患者特異性血清抗體IgE仍具有很強的結(jié)合力,這證實了前人關(guān)于TM具有很強的熱穩(wěn)定性報道;蝦過敏原(TM)經(jīng)輻照處理后,TM與患者特異性血清抗體IgE及鼠源多抗(IgG)的免疫親和力隨著輻照劑量的增加而降低,表明輻照改變了過敏原的生化特性及抗原性,致敏性降低,并發(fā)現(xiàn)TM的溶液狀態(tài)要比固體狀態(tài)和活體狀態(tài)對輻照處理敏感. 研究證明輻照改變了過敏原TM的空間構(gòu)象,從而改變了過敏原的水溶性、疏水性等生物學特性,進而