熱加工、輻照及超高壓微射流對(duì)花生過敏原Arah6結(jié)構(gòu)與抗原性的影響.pdf

1、花生是人類最優(yōu)質(zhì)的植物蛋白來源之一,也是八大類容易引起過敏的食物之一。近年來,由于花生過敏患者數(shù)量呈明顯上升的趨勢,探索降低花生過敏性的研究受到了人們的高度重視。Ara h6是花生主要過敏原之一,可引發(fā)63％的花生過敏患者發(fā)生過敏反應(yīng)。因此,本論文工作以Ara h6為對(duì)象,研究加工對(duì)花生過敏原結(jié)構(gòu)及抗原性的影響,旨在闡明Ara h6經(jīng)加工后的結(jié)構(gòu)變化與其抗原性的關(guān)系。
　　 論文開展的研究工作包括花生過敏原Ara h6的純化與提

2、取、兔抗Ara h6多克隆抗體的制備、熱加工和輻照及超高壓微射流對(duì)花生過敏原Ara h6結(jié)構(gòu)與抗原性的影響。研究的主要方法、結(jié)果及結(jié)論如下。
　　 1.采用陰離子交換層析法從新鮮花生仁中分離純化花生過敏原Ara h6,并通過SDS-PAGE電泳、MALDI-TOF／MS質(zhì)譜對(duì)分離所得目標(biāo)蛋白進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,該方法分離所得的Ara h6的純度大于95％,得率為18.3％。該方法簡單、易操作、重現(xiàn)性好,適用于實(shí)驗(yàn)室少量制備。

3、r>　　 2.以純化的Ara h6為抗原,免疫新西蘭大白兔,獲得抗Ara h6的兔多克隆抗體,通過間接ELISA和免疫印跡方法鑒定其效價(jià)和特異性,結(jié)果表明,該抗體效價(jià)為1:100,000,特異性強(qiáng),可滿足抗原性評(píng)估的要求。
　　 3.對(duì)Ara h6純化蛋白和花生粗蛋白分別進(jìn)行不同的熱處理,通過SDS-PAGE電泳、圓二色譜、紫外光譜、熒光探針光譜檢測Ara h6熱加工后的結(jié)構(gòu)變化,并采用間接ELISA方法測定熱加工后Ara h

4、6純化蛋白和花生粗蛋白的抗原性變化。結(jié)果表明,Ara h6經(jīng)熱處理后,其最大紫外吸光值增大,疏水性增強(qiáng),各類型二級(jí)結(jié)構(gòu)相互轉(zhuǎn)變,且115℃熱處理可使Ara h6形成多聚體；抗原性分析結(jié)果則表明,隨著加熱程度的增強(qiáng),Ara h6純化蛋白和粗蛋白的抗原性降低。由此推斷,Ara h6蛋白經(jīng)熱加工后的構(gòu)象變化導(dǎo)致了它的抗原性降低,蛋白構(gòu)象對(duì)于Ara h6蛋白的抗原性起著關(guān)鍵的作用。
　　 4.對(duì)Ara h6純化蛋白和花生粗蛋白分別進(jìn)行輻

5、照和超高壓微射流處理,通過SDS-PAGE電泳、圓二色譜、紫外光譜、熒光探針光譜檢測Ara h6加工后的結(jié)構(gòu)變化,并采用間接ELISA方法測定加工后Ara h6純化蛋白和花生粗蛋白的抗原性變化。結(jié)果表明,Ara h6經(jīng)輻照或超高壓微射流處理后,蛋白質(zhì)分子展開,疏水基團(tuán)暴露,二級(jí)結(jié)構(gòu)改變,且輻照處理可使Ara h6形成多聚體；間接ELISA檢測結(jié)果表明,隨著輻照劑量的升高或超高壓微射流處理壓力的增加,Ara h6純化蛋白和粗蛋白的抗原性降