口服型生長(zhǎng)抑素基因疫苗對(duì)小鼠腸道局部免疫效果的研究.pdf

1、口服型生長(zhǎng)抑素(Somatostatin，SS)基因疫苗是將pcDNA3.1-HBs／SS質(zhì)粒導(dǎo)入減毒沙門(mén)氏菌(SL7207)中構(gòu)建而成。該疫苗進(jìn)入體內(nèi)能迅速裂解釋放質(zhì)粒，表達(dá)乙肝表面抗原／生長(zhǎng)抑素(HBs／SS)的融合蛋白，刺激機(jī)體產(chǎn)生SS抗體以中和SS，解除SS對(duì)生長(zhǎng)的抑制作用，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。該疫苗具有成本低廉、使用方便、安全性好等特點(diǎn)，有利于在實(shí)際生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。本論文首先對(duì)疫苗的安全性以及細(xì)菌在體內(nèi)的分布進(jìn)行了檢測(cè)，然后闡明了該

2、疫苗對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響，最后就該疫苗表達(dá)融合蛋白的情況和對(duì)腸道免疫功能的影響進(jìn)行了詳細(xì)研究。 口服型SS基因疫苗的安全陛測(cè)定如下：30只健康的4 周齡雌性小鼠，隨機(jī)分為試驗(yàn)組Ⅰ、試驗(yàn)組Ⅱ和對(duì)照組。試驗(yàn)組Ⅰ灌胃給予疫苗菌液10<'9>CFU／只(CFU：菌落形成單位)，試驗(yàn)組Ⅱ給予菌液10<'8>CFU／只，對(duì)照組給予200μLPBS。觀察15天，1周后剖解部分小鼠。結(jié)果顯示，試驗(yàn)組Ⅱ小鼠未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)，剖解后內(nèi)臟無(wú)明顯病變。

3、說(shuō)明該疫苗在10<'8>CFU／7,的劑量下安全性較好。 150只4周齡雌性小鼠，隨機(jī)分為3個(gè)試驗(yàn)組。試驗(yàn)組Ⅰ首次免疫后2、4周分別加強(qiáng)免疫一次，首次免疫劑量為灌胃菌液10<'8>CFU／只(200μL)，加強(qiáng)免疫劑量同首次免疫；試驗(yàn)組Ⅱ?yàn)槭状蚊庖吆蟮?、3天分別加強(qiáng)免疫一次，免疫劑量同試驗(yàn)組Ⅰ：試驗(yàn)組Ⅲ為對(duì)照組，口服PBS 3次，每次200μL。 減毒沙門(mén)氏菌在體內(nèi)分布情況：首次免疫后8天內(nèi)不同時(shí)間段各宰殺小鼠2只，采

4、腸道和肝脾各組織進(jìn)行觸片，姬姆薩染色觀察菌體在組織中的分布情況。結(jié)果顯示，口腔灌服疫苗菌液24 h內(nèi)空腸中細(xì)菌數(shù)量明顯增多，脾臟中在免疫后第4天發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，肝臟在感染后始終未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌。推測(cè)免疫后進(jìn)入腸道中的細(xì)菌可能一部分被分解，一部分被腸道吞噬細(xì)胞攝取轉(zhuǎn)運(yùn)至次級(jí)淋巴器官后誘導(dǎo)局部黏膜免疫和全身免疫反應(yīng)。 口服型SS基因疫苗對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響：從首次免疫開(kāi)始每周每組取10只小鼠稱重，觀察小鼠體重變化。結(jié)果顯示，兩個(gè)試驗(yàn)組小鼠免疫后

5、體重有一定增加，其中試驗(yàn)組Ⅱ增重效果較好，但因觀察時(shí)間太短，增重效果尚未達(dá)到顯著水平。 口服型SS基因疫苗在體內(nèi)表達(dá)融合蛋白的檢測(cè)：首次免疫后于第3、5和7周每組撲殺小鼠8只，應(yīng)用親和免疫組化的方法(ABC法)分別顯示十二指腸和空腸中乙肝表面抗原(HBsAg)陽(yáng)性細(xì)胞和生長(zhǎng)抑素(SS)陽(yáng)性細(xì)胞的分布及數(shù)量變化。結(jié)果顯示，首次免疫后第3周試驗(yàn)組I和試驗(yàn)組II小腸內(nèi)出現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性細(xì)胞并維持到第7周；首次免疫后第5周和第7周兩個(gè)試

6、驗(yàn)組小腸內(nèi)SS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量比對(duì)照組極顯著減少(P<0.01)。結(jié)果證明，口服型SS基因疫苗免疫小鼠后小腸固有層及上皮中一些細(xì)胞可表達(dá)HBsAg/ss融合蛋白，同時(shí)SS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量也減少，推測(cè)該基因疫苗刺激機(jī)體表達(dá)蛋白后能產(chǎn)生SS抗體?？诜蚐S基因疫苗對(duì)小鼠腸道局部細(xì)胞免疫的影響：應(yīng)用HE染色、親和免疫組化(ABC法)、甲苯胺藍(lán)染色的方法分別顯示小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(iIEL)、固有層CD4<,+>T細(xì)胞和肥大細(xì)胞的分布及數(shù)量變化。結(jié)果表