PRP對兔來源脂肪間充質(zhì)干細胞Wnt3基因和Klotho基因表達的影響.pdf

1、研究背景:
　　脂肪干細胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)在2001年被Zuk等于脂肪組織中提取。而后發(fā)現(xiàn)在不同培養(yǎng)基作用下，可誘導ADSCs向脂肪細胞、軟骨細胞、成骨細胞、肌細胞、神經(jīng)細胞、肝細胞、胰島細胞等分化，上述研究表明ADSCs還具有跨胚層、跨系分化的潛能。ADSCs具有以下優(yōu)點:①儲量豐富，來源充足;②獲取方法簡單;③脂肪組織中干細胞含量豐富;④脂肪干細胞增殖能力強，多次傳代遺傳性狀

2、仍穩(wěn)定;⑤屬自體移植，無排斥反應。因此脂肪干細胞作為組織工程的種子細胞越來越受到關注。自體脂肪移植目前廣泛應用于整形外科，但是其成活率低，導致需要多次手術或產(chǎn)生多種并發(fā)癥，使其成為整形外科急需解決的問題。我們在細胞實驗及動物實驗中證明富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)可以提高脂肪移植的成活率，但是其主要作用機制尚不十分明確。Wnt3基因和Klotho基因是干細胞增殖的相關基因，可能與提高脂肪移植成活率有關，

3、因此本實驗中，我們向ADSCs中加入PRP，對這兩種基因的啟動情況進行研究。
　　目的:
　　研究自體富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)對兔來源脂肪間充質(zhì)干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）Wnt3基因和Klotho基因啟動情況的影響。
　　方法:
　　脂肪干細胞提取自新西蘭大白兔附睪脂肪組織，采用形態(tài)學及誘導分化進行細胞鑒定后，將細胞培養(yǎng)至第四

4、代，取新西蘭大白兔腹主動脈血通過傳統(tǒng)二次離心法制備富血小板血漿PRP(platelet-rich plasma)、貧血小板血漿PPP(platelet-poor plasma)，將脂肪干細胞在含PRP（實驗組）、PPP（對照組）及空白全培（空白組）各5％的培養(yǎng)液中分別培養(yǎng)24小時、48小時、72小時，將各組細胞裂解提取總RNA，通過RT-PCR查看兩種目的基因Wnt3基因和Klotho基因表達情況。
　　結果:
　　1.原代

5、兔脂肪干細胞早期為橢圓形，25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)4-6小時后細胞開始貼壁，逐漸變?yōu)殚L梭形，8-10小時后80％橢圓形細胞貼壁，隨著細胞增殖，呈梭形漩渦狀生長;經(jīng)過3-4次傳代培養(yǎng)后，細胞基本得到純化，倒置顯微鏡下，形態(tài)學符合干細胞形態(tài)特征。
　　2.分別向成脂、成骨誘導分化后用油紅O染色和茜素紅染色，均能成功著色，證實為脂肪細胞和骨細胞，證明了此種細胞具有多向誘導分化能力。
　　3.RT-PCR結果顯示實驗組Wnt3基因和K