兔神經(jīng)源性尿路障礙輸尿管功能變化及BKca表達(dá)研究.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)源性尿路功能障礙(NeurogenicurinarytractdysfunctionNUTD)是指任何與排尿有關(guān)中樞和神經(jīng)受到損傷，出現(xiàn)的尿路功能障礙。有效持久保護(hù)上尿路和提高生活質(zhì)量是NUTD基本治療原則;傳統(tǒng)研究表明，上尿路惡化很可能發(fā)生在排尿時(shí)尿道壓力高或膀胱內(nèi)的壓力升高。NUTD的治療的主要目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)低尿液儲(chǔ)存壓力，以保護(hù)上尿路功能。盡管口服抗膽堿能藥物、逼尿肌注射A型肉毒毒素，并且結(jié)合清潔間歇導(dǎo)尿(CIC

2、)，或進(jìn)行外科干預(yù)（如自體膀胱擴(kuò)大術(shù)或腸道膀胱擴(kuò)大術(shù)），可以有效的減低膀胱內(nèi)壓，提高膀胱容量和順應(yīng)性，但部分患者仍出現(xiàn)反流性上尿路損害。提示除下尿路繼發(fā)性尿動(dòng)力學(xué)高危因素外，NUTD上尿路損害發(fā)生還可能與神經(jīng)系統(tǒng)失去對(duì)輸尿管的功能支配后輸尿管發(fā)生自身功能障礙有關(guān)。本研究通過對(duì)骶髓損傷神經(jīng)源性逼尿肌無收縮兔模型建立后兩個(gè)月的輸尿管功能及鈣離子相關(guān)通道檢測，初步探討NUTD早期輸尿管功能變化、病理學(xué)改變以及大電鈣激活鉀通道(large-co

3、nductanceCa2+-activatedK+channels，BKca)的表達(dá)情況，以了解NUTD上尿路功能變化及其機(jī)制，為預(yù)防反流性上尿路損害發(fā)生和阻斷其進(jìn)展提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.動(dòng)物模型的建立:將30只日本大耳白兔隨機(jī)均分為NUTD組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和空白對(duì)照組。NUTD組:以復(fù)方鹽酸賽拉嗪注射液臀部肌肉注射(0.6ml/kg)麻醉后，俯臥固定，于背部沿L5-L7棘突行縱形切口，逐層分離皮暴露L6棘突，在

4、L6棘突兩側(cè)鈍性分離腰大肌，單關(guān)節(jié)咬骨鉗咬除L6棘突，暴露髓腔，眼科剪銳性橫斷脊髓，眼科鑷進(jìn)入髓腔鉗夾搗毀橫斷面下骶髓，填充無菌明膠海綿，逐層關(guān)閉切口，2周后行脊柱MRI和影像尿動(dòng)力學(xué)檢查證實(shí)存在明確神經(jīng)損害，膀胱表現(xiàn)為逼尿肌無收縮但無膀胱輸尿管反流;實(shí)驗(yàn)對(duì)照組:僅咬除棘突，未破壞脊髓，2周后行脊柱MRI和尿動(dòng)力學(xué)檢查證實(shí)不存在明確神經(jīng)損害，無明顯膀胱尿道功能障礙;空白對(duì)照組:未進(jìn)行任何手術(shù)處理。
　　2.建模后2月行影像尿動(dòng)力學(xué)

5、測定、輸尿管功能評(píng)估、形態(tài)學(xué)觀察及輸尿管標(biāo)本制作。
　　3.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法、熒光定量PCR和Westernblot檢測其輸尿管平滑肌細(xì)胞(USMC)BKcamRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.發(fā)現(xiàn)動(dòng)物模型建立后2月NUTD組表現(xiàn)為逼尿肌無收縮，無膀胱輸尿管反流發(fā)生;
　　2.在1ml/kg/min恒定速度靜脈滴注生理鹽水條件下，NUTD組30min內(nèi)產(chǎn)生的尿量為（18.5±3.7）ml、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組為

6、（19.5±2.4）ml、空白對(duì)照組為（17.8±3.2）ml，三組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但左側(cè)輸尿管蠕動(dòng)次數(shù)NUTD組（39.0±3.0）顯著低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（44.0±5.0）和空白對(duì)照組(46.0±4.0)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;
　　3.光鏡下NUTD組輸尿管上皮細(xì)胞、固有層和肌層無明顯變化，外膜有不同程度的充血和炎細(xì)胞浸潤;
　　4.NUTD組USMC中BKcaαmRNA(2.89±0.67)和BKcaβ

7、mRNA(4.59±1.22)表達(dá)相對(duì)于空白對(duì)照組mRNA（BKcaα:1.02±0.21;BKcaβ:1.03±0.28）顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001);NUTD組BKcaα（1.35±0.32）和BKcaβ（1.47±0.10）蛋白表達(dá)相對(duì)于空白對(duì)照組（BKcaα:0.89±010;BKcaβ:1.03±0.13）顯著也上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　結(jié)論：
　　1.神經(jīng)源性尿路障礙(NUT