兔神經(jīng)源性尿路障礙輸尿管功能變化和L型鈣離子通道表達(dá)差異的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　有效持久保護(hù)上尿路是神經(jīng)源性尿路功能障礙(NUTD)基本治療原則，但僅消除下尿路功能障礙的繼發(fā)尿動(dòng)力學(xué)高危因素，并不能完全阻斷反流性上尿路損害發(fā)生，推測(cè)某些病理因素導(dǎo)致了原發(fā)性輸尿管功能障礙。L型電壓依賴性鈣離子通道(LVDCC)介導(dǎo)輸尿管平滑肌細(xì)胞(USMC)胞外Ca2+內(nèi)流，對(duì)維持肌肉收縮與舒張功能具有重要作用。本研究在建立NUTD家兔模型的基礎(chǔ)上，對(duì)輸尿管形態(tài)功能進(jìn)行評(píng)估，探索反流性上尿路損害的輸尿管原發(fā)性尿動(dòng)力

2、學(xué)高危因素及觀察LVDCC在輸尿管的差異表達(dá)情況，為主動(dòng)有效預(yù)防其發(fā)生反流性上尿路損害和阻斷其進(jìn)展提供一種新的治療途徑。
　　方法：
　　30只健康日本大耳白兔隨機(jī)分為NUTD組、sham組、空白組，以復(fù)方鹽酸賽拉嗪注射液臀部肌肉注射進(jìn)行麻醉，備皮，消毒鋪巾。于背部沿L5-L7做一2cm的縱形切口，暴露并咬除L6棘突，銳性橫斷脊髓并搗毀橫斷面以下的脊髓制成NUTD模型。sham組手術(shù)操作如上，但僅咬除棘突后即填充明膠海綿并逐

3、層關(guān)閉切口。空白組無(wú)以上操作。各組家兔均在術(shù)后2月行磁共振檢查觀察其脊髓損傷情況，并行影像尿動(dòng)力學(xué)檢查觀察上尿路返流情況并記錄膀胱形態(tài)及最大膀胱測(cè)壓容量等參數(shù)。后取下腹正中切口，暴露膀胱，向上游離左側(cè)輸尿管并記錄30分鐘內(nèi)蠕動(dòng)次數(shù)(UP)和膀胱內(nèi)產(chǎn)生尿液量(UV)。最后切取一側(cè)輸尿管以4％多聚甲醛固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋，制成切片后行HE染色并觀察其形態(tài)改變?？焖偾腥×硪粋?cè)放入DEPC處理過(guò)的凍存管中，測(cè)定分析各組家兔輸尿管中LVDCC的

4、mRNA及蛋白的差異表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　NUTD組家兔均出現(xiàn)較嚴(yán)重的癱瘓癥狀，磁共振提示脊髓損傷，影像尿動(dòng)力學(xué)提示逼尿肌無(wú)收縮，假手術(shù)組及空白組未提示有明顯異常。最大測(cè)壓膀胱容量、膀胱順應(yīng)性、逼尿肌漏尿點(diǎn)壓、排尿期最大逼尿肌壓力三組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），但三組無(wú)上尿路返流現(xiàn)象發(fā)生。30min內(nèi)產(chǎn)生尿量三組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，NUTD組左側(cè)輸尿管蠕動(dòng)次數(shù)顯著低于sham組和空白組(P＜0.001)。對(duì)其輸

5、尿管標(biāo)本進(jìn)行HE染色提示，三組輸尿管上皮細(xì)胞、固有層和肌層無(wú)明顯差異，但NUTD組外膜有不同程度的充血和炎細(xì)胞浸潤(rùn)。熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，LVDCCmRNA在三組輸尿管均有表達(dá)，其NUTD組LVDCCmRNA表達(dá)水平較其它兩組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，sham組及空白組間無(wú)顯著差異（P≧0.05）;Westernblot檢測(cè)示LVDCC蛋白在三組輸尿管均有表達(dá)，經(jīng)灰度值分析，NUTD組表達(dá)降低(P＜0.001)，s