神經(jīng)源性尿路功能障礙大鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與Skca表達(dá)研究.pdf

1、目的：神經(jīng)源性尿路功能障礙(neurogenic urinary tract dysfunction，NUTD)是指與排尿相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)受到損傷，繼而出現(xiàn)的泌尿系功能障礙，其治療的目的和基本原則是保護(hù)尿路兼顧改善下尿路癥狀。然而，在長期的臨床工作中發(fā)現(xiàn)，下尿路功能障礙的部分患者在經(jīng)過降低膀胱儲(chǔ)尿壓力的治療后，仍然出現(xiàn)反流性上尿路損害。超微結(jié)構(gòu)改變，特別是線粒體變化在平滑肌收縮發(fā)生中扮演重要角色。小電導(dǎo)鈣激活鉀通道（small-conduc

2、tance Ca2+-activated K+ channels，SKca）在調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞興奮性中的作用也很關(guān)鍵。然而 SKca和超微結(jié)構(gòu)在NUTD輸尿管平滑肌細(xì)胞中的變化情況尚不完全清楚，為全面掌握NUTD上尿路功能異常的機(jī)制，本研究通過對(duì)NUTD大鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞Skca表達(dá)檢測(cè)及超微結(jié)構(gòu)變化的進(jìn)行觀察，為反流性尿路損害的早期預(yù)防提供新的方法。
　　方法：
　　1、建立動(dòng)物模型：
　　選取體重200±20g的S

3、D雌性大鼠45只，由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，常規(guī)飼養(yǎng)20d，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)組（即NUTD組）、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（即EC組）、空白對(duì)照組（即BC）組，每組15只。①空白對(duì)照組（BC組）：不做任何處理，應(yīng)用影像尿動(dòng)力學(xué)檢查確認(rèn)其具有正常的尿路功能。②實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（NUTD組）：于建模前12 h禁食禁水，將SD雌性大鼠按每100 g體重腹腔注射0.3ml體積分?jǐn)?shù)為10％的水合氯醛注射液，3-5 min后大鼠麻醉徹底，將大鼠固定在手術(shù)臺(tái)上，

4、固定體位為俯臥位，手術(shù)區(qū)域定位于L1棘突，專用剃毛機(jī)剃去手術(shù)區(qū)域毛發(fā)，消毒后鋪無菌洞巾。沿背部正中縱行切開皮膚，切口長約1.5cm，按層次分離皮下組織、淺筋膜、深筋膜、肌肉，暴露并剪去棘上韌帶，用血管鉗咬去L1棘突，暴露L1節(jié)段脊髓后完全離斷該段脊髓，并搗毀其以下節(jié)段的脊髓。后用生理鹽水沖洗傷口，填充明膠海綿，止血。局部涂抹青霉素以預(yù)防感染。后逐層關(guān)閉手術(shù)區(qū)域，縫合包扎。術(shù)后給予輔助排尿排便，并給予預(yù)防壓瘡措施。術(shù)后1周對(duì)大鼠進(jìn)行影像尿

5、動(dòng)力學(xué)檢查，以存在逼尿肌無收縮（ACD），無膀胱輸尿管反流，為動(dòng)物模型建立標(biāo)準(zhǔn)。③實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（EC組）：只咬除L1棘突，未破壞脊髓。術(shù)后1周行影像尿動(dòng)力學(xué)評(píng)估證實(shí)無明顯膀胱尿道功能障礙。
　　2、模型建立后6周三組大鼠均行輸尿管功能評(píng)估、形態(tài)學(xué)觀察和標(biāo)本的制作。
　　3、采用熒光定量PCR測(cè)定、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)對(duì)輸尿管組織中SKca2、SKca3mRNA和蛋白進(jìn)行測(cè)定
　　4、采用電鏡技術(shù)對(duì)輸尿管超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察

6、>　　結(jié)果：
　　1、大鼠動(dòng)物模型建立后6周NUTD組大鼠膀胱均表現(xiàn)為無逼尿肌過度活動(dòng)、膀胱逼尿肌無收縮。
　　2、30min內(nèi)NUTD組產(chǎn)生尿量為（0.90±0.17）ml，EC組為（0.86±0.18）ml，BC組為（0.94±0.15）ml三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但NUTD組輸尿管蠕動(dòng)頻率(16.23±2.35)次/5min顯著低于 EC組(21.80±1.97)次/5min和BC組（20.47±2.48）次/5min

7、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NUTD組USMC中SKca2和SKca3 mRNA表達(dá)相對(duì)于BC組平均分別上調(diào)4.15和4.56倍（P<0.01），蛋白表達(dá)也顯著上調(diào)（P<0.01）。蛋白表達(dá)也顯著上調(diào)（P<0.01）。
　　3、光鏡下三組大鼠輸尿管肌層、固有層和上皮細(xì)胞形態(tài)無明顯差異，未見充血、水腫及炎細(xì)胞浸潤。
　　4、電鏡下可見NUTD組USMC排列散亂，線粒體體積增大水腫、數(shù)目明顯大于另外兩組，線粒體嵴增粗、髓