Wnt信號在肝細(xì)胞肝癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中調(diào)節(jié)HNF4a表達的分子機制.pdf

1、肝癌在所有癌癥的發(fā)病率中占到了5％,其死亡率在世界排名前三。肝癌病人最不良的結(jié)果是肝癌的高轉(zhuǎn)移性導(dǎo)致其失去手術(shù)切除腫瘤的機會。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程并可最終導(dǎo)致死亡。成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是腫瘤細(xì)胞成功遷移的第一步。許多研究已經(jīng)證實上皮-間質(zhì)(EMT)細(xì)胞轉(zhuǎn)化在腫瘤的轉(zhuǎn)化及進程中發(fā)揮重要的作用。調(diào)控這一轉(zhuǎn)化過程的其中一個信號通路是Wnt信號通路。激浯Wnt信號能促進增殖,上皮形態(tài)缺失和脫分化。Wnt信號在多種腫瘤,如乳腺癌、胃癌、宮頸癌等癌

2、細(xì)胞中調(diào)節(jié)EMT的發(fā)生和發(fā)展。目前在肝癌細(xì)胞中關(guān)于Wnt與EMT的相關(guān)研究較少,并且還沒有明確結(jié)論,下游調(diào)節(jié)的分子機制也不清楚。Wnt信號在肝癌EMT的發(fā)生中,要么不起作用,要么也有一定的調(diào)節(jié)方式。許多研究已證實肝細(xì)胞核因子4-alpha(HNF4a)在胚胎發(fā)育及維持成人肝細(xì)胞分化表型中發(fā)揮重要功能。下調(diào)該基因表達與肝癌發(fā)生及細(xì)胞增殖、上皮形態(tài)缺失、脫分化相關(guān),這正與Wnt信號通路異常激活的功能一致。而我們的研究主要集中在Wnt信號誘導(dǎo)

3、的肝細(xì)胞癌EMT進程是否調(diào)控HNF4a的表達。
　　 本課題從分子、細(xì)胞水平上系統(tǒng)地研究了Wnt信號通路誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌EMT進程負(fù)調(diào)控HNF4a的分子機理。首先,我們在肝癌細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染缺失β-catenin結(jié)合位點的dnTCF驗證Wnt信號與肝癌細(xì)胞EMT形態(tài)的直接調(diào)控關(guān)系,即Wnt信號減弱會導(dǎo)致肝癌細(xì)胞EMT表型改變,肝癌細(xì)胞由紡錘狀的間充質(zhì)形態(tài)向上皮質(zhì)形態(tài)轉(zhuǎn)化。接著,dnTCF導(dǎo)致的Wnt信號缺失能改變EMT標(biāo)記基因E-ca

4、dherin與Vimentin的水平,并下調(diào)Wnt靶基因Axin2、Snail及Slug的水平,說明Wnt信號與肝癌細(xì)胞EMT的正相關(guān)性。再次,我們證實了在肝癌細(xì)胞系中Wnt信號誘導(dǎo)的EMT可負(fù)調(diào)控HNF4a;激活Wnt信號直接導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)HNF4a水平的急劇下降。并通過進一步的研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號主要是通過下游靶基因Snail和Slug與HNF4a啟動子上的E-BOX序列結(jié)合而負(fù)調(diào)控HNF4a。最后,我們的研究還發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路與HNF