2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司提供的動(dòng)物用總抗戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗體試劑盒,采用雙抗原夾心法,檢測(cè)采自上海7個(gè)區(qū)7個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的4、9和18周齡生長(zhǎng)豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬血清樣品共252份,8個(gè)奶牛場(chǎng)的奶牛血清樣品96份,寵物門診寵物犬血清樣品43份,農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)雞血清樣品20份,鴨血清樣品24份,上海野生動(dòng)物園野天鵝等珍禽血清樣品35份,以了解上海地區(qū)HEV抗體在以上 動(dòng)物中的分布情況。結(jié)果表明:88.

2、8%(222/252)的豬,27.9%(12/143)的寵物犬, 23.9%(23/96)的奶牛,檢測(cè)到HEVIgG,雞,鴨,珍禽沒有檢測(cè)到HEVIgG。4、9和 18周齡豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬抗體水分別為2.01±1.46、1.27±0.77、1.65±1.40、2.81±1.34、2.85±1.23;抗體陽性率分別為85.8%(42/49)、84.3%(59/70)、80.9%(52/63)、97.1%(34/35)、100.0%

3、(35/35)。豬場(chǎng)和奶牛場(chǎng)的場(chǎng)陽性率均為100%。表明上海地區(qū)豬群感染HEV很普遍,奶牛和寵物犬感染HEV的比例也很可觀。根據(jù)不同基因型的HEV ORF<,2>中507bp保守序列設(shè)計(jì)兼并引物,用逆轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈方法(Reverse transcription nested polymerase chain reaction,RT-nPCR)檢測(cè)豬糞中HEV RNA。在上海市九個(gè)區(qū)中,每區(qū)隨機(jī)抽取2個(gè)規(guī)模豬場(chǎng),每場(chǎng)收集18份2-3月

4、齡豬的糞樣,對(duì)其中13個(gè)豬場(chǎng)每場(chǎng)隨機(jī)采集13份1月齡以下豬的糞樣,4個(gè)豬場(chǎng)每場(chǎng)采集母豬糞17份,共計(jì)561份。從新疆三個(gè)地區(qū)五個(gè)豬場(chǎng)隨機(jī)采集2-3月齡豬糞98份(部分檢測(cè))。結(jié)果表明,HEV RNA陽性率1月齡豬糞樣品為8.2%(14/169),陽性場(chǎng)率為15.4%(2/13);2-4月齡豬糞樣品陽性率為16.9%(55/324),陽性場(chǎng)率為72.2%(13/18);母豬糞樣品陽性率為17.6%(12/68),陽性場(chǎng)率為75%(3/4)

5、。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆pMD-18T載體上,構(gòu)建成重組質(zhì)粒,并將6個(gè)上海、3個(gè)新疆重組質(zhì)粒測(cè)序,用DNASTAR軟件進(jìn)行同源性分析,Clustalx和Mega3.0軟件繪制基因進(jìn)化樹。與53個(gè)豬源和人源HEV相比,6個(gè)上海株507bp與Ⅳ型的核苷酸同源性為85.6%~88.2%,與Ⅲ、Ⅱ、I型為76.6%~82.5%,6個(gè)上海株間的核苷酸同源性為 94.1%~99.0%。3個(gè)新疆株507bp與Ⅳ型的核苷酸同源性為84.6%~90.4%

6、,與Ⅲ、Ⅱ、I型為76.8%~81.7%,3個(gè)新疆株間的核苷酸同源性為86.1%~98.2%。6個(gè)上海株與3個(gè)新疆株間的核苷酸同源性為85.7%~88.0%。9株HEV都屬于IV型。與兩年前20個(gè)新疆豬HEV ORF<,2>中的348bp序列相比,一株新疆豬HEV株與來自同一地域的7株豬HEV核苷酸同源性為93.6~94.5%?;?48bp和507bp構(gòu)建的進(jìn)化樹都顯示6個(gè)上海株聚在一起,而3個(gè)新疆株分為兩支,一株與兩年前的新疆株相隔

7、較近,其它兩株聚合形成獨(dú)立的分支。表明豬HEV時(shí)空上存在程度不同的變異。設(shè)計(jì)22對(duì)PCR引物分片段擴(kuò)增豬HEV上海株swChinash全基因組,對(duì)兩末端采用快速擴(kuò)增方法(RACE)進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pMDl8-T載體并測(cè)序。用DNASTAR軟件進(jìn)行同源性分析,Clustalx和Mega3.0軟件繪制基因進(jìn)化樹。在全基因組和ORF<,1-3>的基礎(chǔ)上比較上海株與53株人源和豬源HEV的基因組的差異,進(jìn)行基因分型。swChinash全

8、序列除去3’poly(A)尾,由7235個(gè)核苷酸組成,ORF<,1,2,3>分別編碼1707,660,122個(gè)氨基酸。全基因序列與Ⅳ型的核苷酸同源性為83.4‰84.7%,其中與中國人源長(zhǎng)春株(china8)最高,與其他三型為73.3%-76.3%。ORF<,1>與Ⅳ型的核苷酸同源性為80.5%~84.1%,與其他三型為70.8%-74.1%;氨基酸同源性分別為92.6%~94.5%和80.9%~85.7%。ORF<,2>與Ⅳ型的核苷酸

9、同源性為83.8%-86.9%,與其他三型為78.3%~81.2%;氨基酸同源性分別為947%-98.0%和89.4%~93.7%。ORF<,3>與Ⅲ型的核苷酸同源性為89.8%-91.3%,與Ⅳ、Ⅱ、Ⅰ三型為84.9%~88.4%,氨基酸同源性與Ⅳ型為87.6%-93.0%,與Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ三型為77.2%~84.6%?;谌L(zhǎng)基因組和ORF<,1-3>的進(jìn)化樹表明該豬源HEV屬于基因Ⅳ型,但是其變異較大(15.3%~16.6%),單獨(dú)在

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