內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在晚期糖化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)MG63細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6中的作用.pdf

1、目的:晚期糖化終產(chǎn)物(AGEs)與糖尿病骨質(zhì)疏松癥有關(guān)。近年來研究發(fā)現(xiàn)AGEs能夠影響成骨細(xì)胞的骨形成和破骨細(xì)胞的骨吸收,參與骨質(zhì)疏松癥的形成。本實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在AGEs誘導(dǎo)MG63成骨樣細(xì)胞表達(dá)炎癥因子IL-6中的作用,進(jìn)一步了解糖尿病加速骨質(zhì)疏松癥形成的機(jī)制。
　　方法:①以不同濃度的AGEs(0~400μg/ml)作用于MG63細(xì)胞24h,通過MTT法檢測AGEs對(duì)細(xì)胞生長的影響。②不同濃度的AGEs(0~200μg/m

2、l)作用于MG63細(xì)胞24h后,應(yīng)用ELISA法檢測AGEs對(duì)MG63細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6的影響;部分實(shí)驗(yàn)用氨基胍(AG)、牛磺酸熊脫氧膽酸(TUDCA)、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)及二聯(lián)苯碘(DPI)預(yù)處理1h后,再用200μg/mlAGEs刺激24h,ELISA法觀察各種抑制劑對(duì)AGEs誘導(dǎo)MG63細(xì)胞分泌IL-6的影響。③不同濃度的AGEs(0~200μg/ml)作用于MG63細(xì)胞24h后,Western-blot檢測A

3、GEs對(duì)IRE、JNK磷酸化及總蛋白含量,GRP78總蛋白含量表達(dá)的影響;Western-blot觀察各種抑制劑AG、TUDCA、NAC及DPI預(yù)處理1h后再用200μg/mlAGEs刺激24h對(duì)IRE、JNK磷酸化及總蛋白含量,GRP78總蛋白含量表達(dá)水平的變化情況。
　　結(jié)果:①不同濃度AGEs作用于MG63細(xì)胞24h后,MTT結(jié)果顯示50~200μg/mlAGEs作用24h對(duì)細(xì)胞的生存率無明顯變化;但是400μg/mlAGE

4、s作用于MG63細(xì)胞24h后能夠抑制細(xì)胞的生長(P<0.05)。②不同濃度AGEs作用于MG63細(xì)胞24h后,ELISA結(jié)果顯示50~200μg/mlAGEs可促進(jìn)MG63細(xì)胞上調(diào)IL-6表達(dá),200μg/mlAGEs作用最明顯(p<0.01);AG、TUDCA、NAC及DPI能明顯抑制AGEs上調(diào)炎癥因子IL-6的表達(dá)(p<0.01)。③不同濃度AGEs作用于MG63細(xì)胞24h后,Western blot結(jié)果顯示50~200μg/ml

5、AGEs可上調(diào)IRE、JNK磷酸化水平和GRP78總蛋白含量的表達(dá),200μg/mlAGEs作用最明顯(p<0.01);AG、TUDCA、NAC及DPI均能抑制IRE、JNK磷酸化水平和GRP78總蛋白表達(dá)(P<0.01)。
　　結(jié)論:AGEs可促進(jìn)MG63細(xì)胞分泌炎癥因子IL-6,其機(jī)制與激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。AG、NAC及DPI能夠逆轉(zhuǎn)AGEs引起的IRE、JNK磷酸化水平和GRP78總蛋白含量的表達(dá)升高及IL-6上調(diào),表明內(nèi)質(zhì)