KDR在人前列腺癌的表達(dá)及KDR反義寡核苷酸對(duì)PC-3細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的:前列腺癌(prostatic cancer,Pea)是歐美男性人群中發(fā)病率、死亡率很高的疾病。近年來(lái)，該疾病的發(fā)病率在亞洲國(guó)家也有上升趨勢(shì)。雖然治療PCa的方法較多，但臨床上尚缺乏治療雄激素非依賴勝前列腺癌的有效方法，因此如何誘導(dǎo)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生長(zhǎng)成為該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。許多研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在多種腫瘤組織高表達(dá)，與腫瘤

2、的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，VEGF與其特異的激酶插入?yún)^(qū)受體(kinase insert domain-containing receptor,KDR)結(jié)合后發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，在腫瘤起始和充分發(fā)展階段介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成。已有一些研究表明，VEGF廣泛表達(dá)于前列腺癌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞，與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有一定的關(guān)系，但目前有關(guān)KDR與PCa關(guān)系的研究尚不多。因此，本研究觀察了KDR在臨床PCa組織及PCa三株細(xì)胞的表達(dá)隋況，并以良性前列腺

3、增生(benignprostatic hypertrophy，BPH)組織作對(duì)照，然后對(duì)高表達(dá)KDR基因的PC-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染不同濃度的KDR反義寡核苷酸(antiscnse oligodeoxyribonucleotides，ASODN)，檢測(cè)ASODN對(duì)KDR表達(dá)的影響，以及對(duì)PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期和凋亡的作用。 方法:1．收集48例PCa和20例BPH組織標(biāo)本，運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)分析KDR的表達(dá)，比較KDR在PCa和BP

4、H組織中表達(dá)的差異。2．培養(yǎng)LNCap、DU-145和PC-3三株前列腺癌細(xì)胞。運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)分析KDR在三株細(xì)胞的表達(dá)情況，并分析其在三株細(xì)胞表達(dá)的差異。3．在表達(dá)KDR最強(qiáng)的PC-3細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染不同濃度KDR ASODN，運(yùn)用MTT法檢測(cè)不同干擾濃度下PC-3細(xì)胞的生長(zhǎng)隋況；用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)KDR的表達(dá)；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PC-3細(xì)胞周期的變化及細(xì)胞凋亡情況。分析不同濃度KDRASODN對(duì)PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)、KDRmR

5、NA表達(dá)、細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果:1.KDR在PCa和BPH組織表達(dá)的免疫組織化學(xué)結(jié)果為：①KDR在PCa和BPH組織中均有表達(dá)，但在PCa組織中表達(dá)的強(qiáng)度和密度均較BPH組織強(qiáng)。②KDR在中分化和低分化PCa組織表達(dá)強(qiáng)度的陽(yáng)性率有差異，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③KDR在PCa細(xì)胞及間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)。2．實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，三株P(guān)Ca細(xì)胞中KDR在PC-3細(xì)胞的表達(dá)最強(qiáng)，其次是DU-145細(xì)胞，在LNCap細(xì)

6、胞表達(dá)最弱。3．KDR ASODN轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞后48小時(shí)細(xì)胞增殖抑制達(dá)最高峰，且抑制率與ASODN濃度相關(guān)。正義寡核苷酸(Sense oligodeoxynucleotide，SODN)和陽(yáng)離子脂質(zhì)體(Lipofectamine 2000，L2000)對(duì)PC-3細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用。不同濃度ASODN干擾后使PC-3細(xì)胞中KDR mRNA的表達(dá)出現(xiàn)不同程度的下降。流式細(xì)胞術(shù)顯示細(xì)胞周期未發(fā)生改變，但各濃度組均出現(xiàn)不同程度細(xì)胞凋亡

7、，凋亡率最高達(dá)48.6％。 結(jié)論:1．KDR在PCa和BPH組織中均有表達(dá)，PCa組織中的表達(dá)強(qiáng)于BPH組織中的表達(dá)；在中分化和低分化PCa組織的陽(yáng)性表達(dá)率有差別，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有待進(jìn)一步研究。2．KDR在激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株的表達(dá)強(qiáng)于其在激素依賴性細(xì)胞株的表達(dá)，在PC-3細(xì)胞中表達(dá)最強(qiáng)。3．用不同濃度KDR ASODN轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞后48小時(shí)達(dá)增殖抑制高峰，細(xì)胞中KDRmRNA的表達(dá)有不同程度的下調(diào)，引起不同程度的