華蟾素注射液對前列腺癌PC3細胞增殖抑制及VEGF-KDR表達的影響.pdf

1、目的:探討華蟾素注射液對前列腺癌 PC3細胞的增殖、凋亡、侵襲能力及VEGF/KDR mRNA及蛋白表達的影響。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)前列腺癌PC3細胞株,采用MTT(四甲基偶氮唑藍)法檢測不同濃度華蟾素注射液(0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l)對前列腺癌PC3細胞增殖的影響,同時設立空白對照組。(2)FCM法分析該藥對PC3細胞周期分布的影響。(3)DNA Ladder檢測細胞凋亡情況。(4)

2、細胞劃痕試驗檢測藥物對PC3細胞的遷移能力的影響。(5)RT-PCR法檢測經(jīng)藥物處理PC3細胞后對VEGF/KDRmRNA表達水平的影響。(6)蛋白印跡法檢測藥物處理PC3細胞后,細胞中VEGF及KDR蛋白表達水平的變化。
　　結果:(1)MTT法檢測結果顯示,不同濃度華蟾素注射液(0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l)能有效抑制前列腺癌PC3細胞的增殖作用,隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長,藥物的作

3、用效果明顯增加,并對其生長抑制率進行組間和組內統(tǒng)計學分析,均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明華蟾素對PC3細胞的抑制作用具有一定的濃度和時間依賴性。(2)FCM法檢測PC3細胞分布比例可見用華蟾素注射液作用后,G1/G0期細胞比例顯著減少,S期細胞比例顯著增加,而G2/M期細胞比例變化不大,經(jīng)統(tǒng)計學分析P<0.05。表明Cino能將PC3細胞阻滯在S期從而抑制細胞的增殖。(3)DNA凝膠電泳法檢測到藥物處理后出現(xiàn)明顯的梯度條帶,DN

4、A出現(xiàn)不同程度的降解,表明Cino抑制細胞生長在一定程度上是通過誘導凋亡來實現(xiàn)的。(4)細胞劃痕試驗發(fā)現(xiàn)華蟾素注射液具有一定抑制PC3細胞遷移的能力及抑制細胞生長的作用。(5)RT-PCR法檢測結果顯示華蟾素注射液降低VEGF/KDR RNA表達水平從而起到抑制作用,且根據(jù)灰度分析得到隨著藥物濃度增高其表達水平逐漸降低。(6)蛋白質印跡法檢測結果顯示,不同濃度華蟾素注射液(2.5、5、10mg/l)處理PC3細胞48h后,隨著藥物濃度的

5、增加VEGF和KDR蛋白表達量逐漸降低,具有一定的濃度依賴性。
　　結論:華蟾素注射液可以抑制前列腺癌PC3細胞的生長,并呈一定的時間-劑量依賴性關系,測得IC50約為6.5mg/l,最佳作用時間為48h;華蟾素注射液對前列腺癌PC3細胞有明顯的誘導凋亡作用,并能使腫瘤細胞阻滯于S期;華蟾素注射液在一定程度上可以抑制前列腺癌PC3細胞的遷移能力;華蟾素注射液可以明顯降低VEGF及KDR蛋白及mRNA的表達水平,從而抑制腫瘤細胞的生