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1、目的:糖尿病膀胱病變(DCP)是糖尿病的常見(jiàn)并發(fā)癥之一,它嚴(yán)重影響著人類(lèi)的健康狀況和生存質(zhì)量,因此越來(lái)越受到人們的重視。DCP的病因尚不完全清楚,且影響因素很多。但不論哪種因素要影響膀胱的功能與形態(tài)都必須通過(guò)膀胱逼尿肌細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn),所以近年來(lái)對(duì)于DCP肌原性因素的研究成為熱點(diǎn)。一方面,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)糖尿病膀胱逼尿肌舒張功能早期就受到損傷,另一方面,腎上腺素能β3受體(β3-AR)是調(diào)節(jié)人和大鼠逼尿肌舒張功能的最主要因素。據(jù)此,本研究應(yīng)用鏈
2、脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射誘導(dǎo)形成Ⅰ型糖尿病大鼠動(dòng)物模型,通過(guò)蛋白印記方法(Western blotting 法)研究糖尿病大鼠膀胱中腎上腺素能β3受體(β3-adrenergic receptor,β3-AR)的表達(dá)情況,分析糖尿病膀胱病變(diabetic cystopathy,DCP)與膀胱中β3-AR表達(dá)的相關(guān)性,探討β3-AR在DCP發(fā)生發(fā)展中的作用,為應(yīng)用高選擇性β3-AR激動(dòng)劑治療DCP奠定理
3、論基礎(chǔ)。 方法:將80只體重在180g-200g之間的健康清潔級(jí)Wistar雌性大鼠按隨機(jī)化原則分為糖尿病模型組(n=40)及正常對(duì)照組(n=40)。糖尿病模型組隨機(jī)分成5組,分別在發(fā)病第2周、4周、6周、8周及10周取材實(shí)驗(yàn),各時(shí)間點(diǎn)均設(shè)立正常對(duì)照組,每組8只大鼠,即2周糖尿病模型組及對(duì)照組,4周糖尿病模型組及對(duì)照組,6周糖尿病模型組及對(duì)照組,8周糖尿病模型組及對(duì)照組,10周糖尿病模型組及對(duì)照組(n=8)。應(yīng)用鏈脲佐菌素(st
4、reptozotocin,STZ)腹腔注射,將40只健康清潔級(jí)Wistar大鼠誘導(dǎo)形成Ⅰ型糖尿病大鼠模型,劑量為60mg/kg,正常對(duì)照組腹腔注射等體積的枸櫞酸緩沖液。注射STZ72小時(shí)后測(cè)尾靜脈血葡萄糖濃度(blood glucose,BG)。糖尿病模型組大NBG>16.7mmol/L,并且持續(xù)一周為模型成功。兩組均普通飼料飼喂,自由進(jìn)食進(jìn)水。將造模成功的大鼠分別于發(fā)病第2周、4N、6N、8N及10周時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),再次檢測(cè)兩組大鼠尾靜脈
5、血葡萄糖濃度,糖尿病模型組大鼠BG<16.7mmol/L仍被排除。蘇木素-伊紅(Haematoxy-lin-Iraq red,HE)染色后,光鏡下觀察糖尿病大鼠膀胱逼尿肌的形態(tài)學(xué)變化。采用蛋白印記方法(Western blotting法)檢測(cè)各組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞β3-AR蛋白的表達(dá)情況。采用SPSS13.0系統(tǒng)軟件對(duì)數(shù)據(jù)處理:結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±Std)表示,進(jìn)行t和t1檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果: 1.動(dòng)物
6、一般情況:肉眼觀察:糖尿病模型組大鼠隨病程增加逐漸出現(xiàn)糖尿病癥狀,如皮毛失去光澤,飲水量、食量、尿量增加,排泄稀便等。各糖尿病模型組大鼠血糖明顯高于相應(yīng)的正常對(duì)照組,依次為[2w:(34.4±0.4mmol/L)vs(4.4±0.4rnmol/L),4w:(32.64±3.7mmol/L)vs(5.24±0.5mmol/L),6w:(35.1±3.7mmol/L)vs(5.5±0.2mmol/L),8w:(30.9q±3.3mmol/L
7、)vs(4.8±0.3mmol/L),10w:(34.24±2.9mmol/L)vs(4.54±0.6mmol/L)(P<0.05)]:正常對(duì)照組生長(zhǎng)良好,體重逐漸增加,各組糖尿病模型組大鼠體重較正常對(duì)照組增長(zhǎng)緩慢,依次為[2w:(188.05±10.03g)vs(212.804±10.26g),4w:(190.224±8.31g)vs(258.22±10.31g),6w:(188.06±13.52g)vs(311.80±8.92g),
8、8w:(174.83±12.18g)vs(342.80±16.91g),10w:(175.23±11.23g)vs(345.16±15.22g)(P<0.05)];膀胱濕重測(cè)定:糖尿病模型組大鼠膀胱濕重明顯重于正常對(duì)照組,依次為[2w:(183.99±14.89mg)vs(150.34±5.30mg),4w:(200.17±14.40mg)vs(150.48±9.86mg),6w:(207.27±17.92mg)vs(152.90±9.
9、83mg),8w:(210.58±2095mg)vs(148.04±9.72mg),10w:(223.94±20.45mg)vs(145.28±11.60mg)(P<0.05)]。各糖尿病模型組血糖、體重、膀胱濕重相比較差異無(wú)顯著性意義。 2.大鼠膀胱逼尿肌病理學(xué)改變:HE染色后光鏡下觀察正常組和各組糖尿病模型組大鼠逼尿肌的結(jié)構(gòu)表現(xiàn)。正常對(duì)照組:移形上皮細(xì)胞排列整齊,固有膜完整,逼尿肌細(xì)胞大小形態(tài)均一,肌纖維排列有序,肌束之間結(jié)
10、構(gòu)緊密,間隙被結(jié)締組織所充滿。各時(shí)間段的糖尿病組膀胱逼尿肌均出現(xiàn)損害,并隨病程延長(zhǎng)而加重。具體表現(xiàn)為:逼尿肌細(xì)胞代償性肥大,形態(tài)多樣,變性,間質(zhì)和膠原成分增多,之后肌束排列紊亂松散,肌束橫斷面飽滿,體積增加,肌束之間間隙明顯增寬,膠原及纖維組織明顯增生并出現(xiàn)大量空泡;最后逼尿肌細(xì)胞萎縮、減少甚至消失,僅見(jiàn)大量的膠原及彈性纖維成分。 3.大鼠膀胱逼尿肌β3-AR蛋白表達(dá)情況:蛋白印記方法結(jié)果顯示:糖尿病模型組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞β3
11、-AR蛋白表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞內(nèi)β3-AR蛋白表達(dá)水平,依次為[2w:(0.73+0.09)vs(0.35±0.04),4w:(0.81±0.13)vs(0.32±O.06),6w:(0.72±0.05)vs(0.33±0.04),8w:(0.55±0.07)vs(0.33±0.06),10w:(0.52±0.07)vs(0.33±0.05)(p<0.05)],其中以2周,4周及6周時(shí)增加更明顯。 結(jié)論:
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